脑出血患者神经元凋亡及Bcl-2、Bax表达和中风闭脱证的研究.pdfVIP

西药组比较PO．05。已知Vp是一种肽能神经递质与血管的舒张有关，能对全身血管产生很强的舒张作 用，V口减少则可产生血管痉挛。SP是与疼痛有关的一种肽神经递质，sP生理性升高，能引起内源鸦片 样物质释放，而起到镇痛作用。蛛网膜下腔出血病人临床表现有剧烈头痛，提高sP对患者起到镇痛镇静 作用，从而避免情绪波动再出血，蛛网膜下腔出血病人并发症有血管痉挛，V礤提高可舒张全身血管，减 少脑血管痉挛的危险性。 参考文献： [1】赵金锋，等，中医证状鉴别诊断学。北京：人民卫生出版社1983．9l 【2】沈自严，等，中医虚证辩证参考标准。中国中西医结合杂志1986，6(10)：598 RuseURW：V瓠culardiseaseofthecen廿alnervous edition．New 【3】Ross system．Second 998，273 LiVingston，1 l 联系方式：李智文：Tel：059 Email：!￡!竺墨5璺2里@12鱼：￡Qm 脑出血患者神经元凋亡及Bcl．2、Bax表达与中风闭脱证的研究 吴成翰丁喜艳李会忠王谨敏林菊珊吴松鹰 福建省中医学院附属第二人民医院神经科(福建350003) 黄绳跃雷惠新余吉福建省立医院神经外科 郑登滋福建省中医学院附属第二人民医院检验科 本课题将出血性中风闭(阳闭、阴闭)、脱两证作为研究内容，以探讨脑出血患者血肿周围组织细胞 凋亡及其调控基因Bcl一2、BaX蛋白表达与中风分型有无相关陛，为中医辨证提供微观指标。 1 资料与方法 1．1诊断标准 1．1．1脑出血的诊断标准(参照1994年全国第四届脑血管病学术会议通过的《各类脑血管疾病诊断 要点》) 1．1．2中风闭证和脱证标准(参照《中药新药临床研究指导原则》和第五版《中医内科学》有关内容 制定) 1．2研究对象 病人。 。 (1)病例纳入原则：所选病例均既需符合脑出血的诊断要点，又须根据中风中医诊断标 准辨证为以上某一证型，经外科手术的病人为人选病例。 (2)病例排除原则：排除其它脑血管疾病及合并有肝、肾、造血系统和内分泌等严重原发性疾病、 精神病患者及小脑和脑干出血患者。同时不能被辨证为上述二型之一者。 1．2．2正常对照组来源：取自6例意外死亡，需司法鉴定，由法医提供的脑组织。 以上各组间经年龄和性别齐同性检验P0．1，说明各组问在年龄和性别上差异不明显，具有可比性。 1．3研究方法与步骤 1．3．1收集符合条件的病例，根据改良爱丁堡与斯堪的那维亚研究组所定的《脑卒中临床神经功能缺 损程度评分标准》进行评分。 1．3．2脑组织样品的采集：收集符合条件的脑出血病人29例，根据颅脑CT扫描显示的血肿部位，选 择血肿层面、靶点及取材部位，立体定向坐标引导下行血肿清除术。取手术过程中引流出的脑组织为病理 标本，6例对照组取自意外死亡，需司法鉴定，在3小时内由法医提供的尸体解剖脑组织标本。以上脑组 织标本均用10％甲醛固定常规石蜡包埋，分批检测。该研究经医院伦理委员会批准。 1．3．3免疫组织化学染色检测Bcl一2、Bax蛋白表达水平 术有限公司，具体操作步骤如下： (1)脱蜡、水化组织切片。 (2)3％H202去离子水孵育10砸n，以阻断内源性过氧化物酶。 (3)对组织切片进行高压修复2IIlin，PBS冲洗，2Inin×3次。 (4)滴加一抗，室温孵育l一2小时，PBs冲洗，2ITlin×3次。 (5)滴加PolymerHelper试剂，室温孵育20IIlin，PBs冲洗，2min×3次。 (6)滴加P01)，peroxidaSe—anti-mousekG试剂，室温孵育20一30Ⅱlin，PBS冲洗，2IIlin×3次。 (7)应用DAB溶液显色。 (8)自来水充分冲洗、复染、脱水、透明、封片。 镜下细胞浆染色呈棕黄色为Bcl一2、Bax阳性细胞，每张切片上选择lO个具有代表性的高倍视野 (×400)，计数阳性细胞数和阴性细胞数，并计算阳性率【阳性率=阳性细胞数／(阳性细胞数+阴性细胞数) ×100％】，