牛分枝杆菌新型DNA疫苗对BALB%2fc小鼠的免疫效果的研究.pdfVIP

522 中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术研讨会论文集 牛分枝杆菌新型DNA疫苗对BALB／c 小鼠的免疫效果研究 宫强，刘思国。，郭设平，王春来，王勇，刘建东，赵昆，迟磊，孔宪刚 (中国农业科学院哈尔演兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001) 光检测目的基因的表达情况。然后进行动物免疫，实验动物分四组印：pcE6组，pc70．83．E6组、pcDNA3．1(+) 前肌)免疫，PBS组每只小鼠胫前肌免疫100p11xPBS，各组均进行了三次免疫，每次间隔两周。间接ELISA 检测免疫后小鼠血清特异性抗体水平，MTT法检剥免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况和IFN—v分泌情况．结果 表明，两种重组质粒免疫后小鼠血清抗体水平持续上升，而pcDNA3．1(+)组和PBS组的血清抗体始终维持在 著(P005)；PPD刺激后两重组质粒免疫的小鼠脾细胞产生的IFN～y均显著高于两对照组产生的IFN—v 疫苗，从而为牛结核病新型疫苗的研制提供了理论依据。 关键词：牛分枝杆菌；esat-6基因；mpb70-mpb83融台基因；DNA疫苗；免疫应答 牛结核病是南牛分枝杆菌引起的一种人畜共患慢性消耗性传染病，本病前在许多国家尤其是发展 中国家仍然广泛流行，严重地影响到畜牧业的持续健康发展，每年给世界农业带来约30亿美元的损失， 它不仅可造成奶牛乳房炎、结核性胸膜炎等疾病，还会造成产乳率和乳质下降，更严重威胁着人类的 健康。大多数国家对于本病均采取榆疫后扑杀的策略，这必然会造成巨大的经济损失。目前许多学者 正在致力于牛结核病疫苗的研究，但迄今为止临床上还没有任何一种可用的疫苗。传统的卡介苗(BCG) 是预防人结核病的唯一疫苗，但BCG的免疫效果极不稳定，不同地区的人群接种BCG后免疫保护效 免疫后可使免疫牛产生PPD试验阳性反应而干扰本病的诊断。因此研制新型抗牛结核疫苗势在必行， 正在研究的疫苗主要有减毒或增强的活疫苗、全菌体灭活疫苗、亚单位疫苗、初免_由Ⅱ强疫苗、DNA疫 苗等但研究表明，很少有疫苗的保护力能超过BCGt4l。因此研究抗牛结核疫苗不仅对于本病的防制至 关重要，而且对野生动物的免疫预防和公共卫生都具有重要意义。 本试验利用PCR技术从牛分枝杆菌Vallee DNA疫苗，对免疫后的BALB／c小鼠进行体液免疫和细胞免疫指标的检测，旨在为牛结核病新型疫苗 的研究奠定基础。 1材料和方法 1．1材料 ·赍金项目：国家科技攻关计划一奶牛主要疫病防治关键技术研究与产业化开发课题资助项目(2002BA518A04) 作者简介：富强(1970年一)，男，山东泰安人，博士，从事分子生物学研究。 5076．Fax：0451 ·通讯作者：刘思国，E-mail：ls9960@sohu,com．Phone：0451—8593 中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术研讨会论文集 523 1．1．1茵种牛分枝杆菌(M．boris)VMIeeIII菌株购自中国药品检定所。 1．1．2实验动物6-8周龄BALB／c小鼠购自哈尔滨医科大学第二医院。 购自华舜生物工程有限公司；小鼠IFN一1ELISA检测试剂盒购自北京晶美生物工程有限公司；MIT 购自上海华舜生物工程有限公司。 1．2方法 1．2．1 esat一6、mpb70～mpb83基因的PCIL扩增 根据GeneBank中发表的已知序列设计特异性引物，引物序列如下： 表1：mpb70、mpb83、esat一6引物序列 Tablel：Primer sequenceofmpbT0、mpb83andesat-69ene 划线为BamHl位点，f含起始密码子．；g：含终止密码子，下划线为EcoRI位点。 Nom：a：The isunderlinedandinitiatorisconcluded．b：Thelinkeris Kpn／recognitionsequence shaded．e：The