毛细管电泳光导纤维发光二极管诱导荧光检测人血浆中羟苯乙醇胺地研究.pdfVIP

2006年11月 第七届全国毛细管电泳及相关微纳分离分析学术报告会文集 上海 毛细管电泳光导纤维发光二极管诱导荧光检测 人血浆中羟苯乙醇胺的研究 于清蕾，赵书林+ (广西师范大学化学化工学院，桂林541004) l引言 可作为神经递质、神经激素和神经调节剂。在脊椎动物神经系统中，OCT被认为是假性神经递质， 有增强人体新陈代谢功能和治疗神经衰弱等疾病的作用‘1’21。另外，临床也认为，肝性脑病的发病机 理主要与氨基酸代谢不平衡、氨中毒和OCT等过多等情况有关，OCT是直接导致肝昏迷的重要因素 [3，41。因此，建立生物样品中OCT的定量测定方法，对OCT的生理学和临床医学研究具有重要意义。 OCT在人体血浆中含量很低，测定难度较大。目前，检测OCT的方法主要有：稳定同位素稀 法【7】等。随着毛细管电泳(CE)技术的迅速发展，其快速、高效、低成本、样品用量少等优点，为生 物样品的分离和检测提供了一种强有力的技术手段。Paula等用胶束电动毛细管色谱连电化学检测器， 测定了果蝇体内的羟苯乙醇胺、多巴胺、5一羟基色胺等生物胺的含量[8】。本实验采用自设计、组装的 毛细管电泳光导纤维发光二极管诱导荧光检测装置建立了测定人血浆样品中羟苯乙醇胺含量的新方 法。以紫色发光二极管作为激发光源，2，3一萘二醛(NDA)作为柱前衍生试剂，经过条件优化后， 确立了羟苯乙醇胺分离和测定的最佳条件，并将该方法应用于人血浆中羟苯乙醇胺含量的测定。 2实验部分 2．1主要仪器和试剂 自组装毛细管电泳光导纤维发光二极管诱导荧光检测装置[9】；未涂层石英毛细管63cm(有效 cm)x75 长度60 umID(河北永年光导纤维厂)；发光二极管(激发波长为405am，深圳世峰科技 有限公司)；高压电源(0～30 公司)。 Probes公司)： 它试剂均为分析纯，实验用水为高纯石英亚沸蒸馏水。 2．2溶液配置 精确称取羟苯乙醇胺标准品0．0019 g，溶于甲醇中，配制成10 分别溶于甲醇和水中，配制成2mmol／L和20 前用0．45¨m滤膜过滤。 2．3样品处理 min，然后在 取200uL人血浆，置于1．5mL的离心管中，加入2倍体积乙腈，旋涡振荡混合2 1．2x104r／min下高速离心20min，取上层清液，用氮气吹干，再用20uL mmol／L硼砂 pH=9．5的10 缓冲溶液溶解残留物，试液置于冰箱(0C)中保存。 2．4柱前衍生 158 2006年11月 第七届全国毛细管电泳及相关微纳分离分析学术报告会文集 上海 取10uL羟苯乙醇胺标准溶液或样品溶液于500 mmol／L gL塑料离心管中，加入50“L浓度为2 的NDA甲醇溶液和50uL浓度为20 mmol／L硼砂缓 mmol／L的KCN水溶液，再加入pH=9．5的10 冲溶液至200 min进样。 gL，置于暗处，室温下反应20 2．5毛细管电泳操作 min。 新毛细管依次用1m01．L．1的NaOH溶液，亚沸蒸馏水和lm01．L．1的HCI溶液