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（四） DNA复制方式的实验验证 * * * * * * 授课人：刘丽红 DNA的复制 （一）提出问题： DNA是怎样进行复制的？ 【环节一】探究DNA的复制 亲代DNA分子 子一代 子二代 亲 代 全保留复制：新复制出的DNA分子直接形成，完全没有旧的部分 小组讨论:根据你对DNA结构的了解，尝试对DNA复制进行大胆的推测,并且对亲代DNA、复制得到的子一代DNA和子二代DNA的组成进行分析 （模拟刚才全保留的形式，把你的推测写到演草纸上） （二）提出假说:DNA是半(全)保留复制 （三）演绎推理：亲子代DNA的组成 亲代DNA分子 半保留复制：新复制出的DNA分子一条链为母链一条链为子链。 半保留复制 子一代 子二代 亲 代 问题1:如果要在实验中直观地区别、“标识” 　　　母链或子链,可以采取什么办法？ 问题2:可以用什么元素的同位素(放射性) 进行标记? 演绎推理:如果亲代DNA是15N作标记的，放在 14N的环境中进行培养，则亲代、子一代、 子二代DNA分别含有哪种N元素？其质量如 何（用重、中、轻表示）？占每代DNA总数 的比例又是多少呢？ 同位素标记法 C 、H 、O、 N 、P 15N/15N-重型DNA(全部) 子一代 子二代 亲 代 15N/14N-中型DNA(全部) 15N/14N-中型DNA(1/2) 14N/14N-轻型DNA(1/2) 半保留复制 15N/15N-重型DNA(全部) 15N/15N-重型DNA(1/2) 15N/15N-重型DNA(1/4) 14N/14N-轻型DNA(3/4) 全保留复制 子一代 子二代 亲 代 14N/14N-轻型DNA(1/2) 大肠杆菌 分裂快，约20分钟分裂一次 同位素示踪法 选取15N和14N作为标记 问题３: 要验证上述预测,就要分别观察亲代和子代的情况,但实验中,复制后的DNA分子通常是随机混合在一起的，不易分离。怎么解决这个问题？ 可以通过离心使其发生分层(15N质量大于14N) 复制前 复制后 密度梯度离心法 中 轻 重 15N/15N-DNA 14N/14N-DNA 15N/14N-DNA 密度 高 低 用含15NH4Cl的培养基培养大肠杆菌 若干代后, 大肠杆菌: 15N-DNA 提取DNA离心 记录离心管中DNA的位置 实验过程 请预期第一代可能的结果： 半保留复制？ 全保留复制？ 轻 重 中 全 保 留 半 保 留 15N/15N-DNA 转移到含14NH4Cl的培养液中 轻 重 中 全 保 留 半 保 留 15N/15N-DNA 转移到含14NH4Cl的培养液中 请预期第二代可能的结果： 半保留复制？ 全保留复制？ （五）得出结论 DNA复制的方式：半保留复制 　　　 　 模拟演练 问题探究 1、复制产生的子代DNA 在组成成分及结构上 与亲代DNA是否一致？ 2、亲子代DNA所蕴 含的遗传信息是否 相同？ 复制一次 【探究DNA的复制小结】 提出假说 演绎推理 验证假说 假说演绎 （2）DNA复制是半（全）保留复制 （3）根据假说演绎复制后 子代DNA可能的情况 （4）设计实验进行验证 （1）DNA是如何进行复制的？ 提出问题 （5）DNA复制方式是半保留复制 得出结论 【环节二】 DNA复制的过程 小组讨论：根据DNA的组成及双螺旋结构的特点，推测DNA半保留复制的具体过程。（讨论1分钟） 【环节二】 DNA复制的过程 解旋酶催化（氢键断裂，消耗能量ＡＴＰ） 一、解旋 模板 （在DNA聚合酶的催化下，利用游离的脱氧核苷酸进行） 二、复制 以母链为模板进行碱基配对 母链（旧链） 子链（新链） 三、子代DNA复旋 同时进行(边解旋边复制） 组成 半保留复制 DNA分子复制的过程及其特点 1.场所： 2.时间： 3.条件: 细胞核(主)、线粒体、叶绿体 细胞分裂间期(有丝分裂、减数分裂) (1)模板：解旋的DNA两条单链 (2)原料：脱氧核苷酸 (3)能量：ATP (4)酶：解旋酶、DNA聚合酶 【环节三】缕一缕 顺一顺 4.特点: 5.“准确”复制的原理：（阅读课本５４页） （1）DNA分子独特的双螺旋结构，为复制提供了 精确的模板； （2）碱基互补配对原则，保证了复制能够准确地进行。 6.意义： (1)边解旋边复制 (2)半保留复制 将遗传信息从亲代传给子代，从而保持遗传信息的连续性。 变通：亲代母链与子代DNA链数之比为：