PiggyBac转座子介导的SV40T%2fp53转基因鼠生产与诱导细胞永生化研究.pdfVIP

53转基因鼠生产及诱导细胞永生化研究 P延固谬口c转座子介导的SV40T／p 张婷婷，李欣憾，陈知龙，张智英+ 西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌，712100 引言 PiggyBac转座子是高效的转基因研究工具，可将外源基因插入到基因组中的T吖姨位点，可携带高达 诱导表达SV40T／p531拘转基因鼠，通过杂交获得大量转基因小鼠后代，分离其原代细胞并通过四环素类似 物多西霉素(Dox)的诱导，在小鼠原代细胞中表达目的基因，实现细胞的永生化，为细胞功能和基因功 能研究提供材料。 材料与方法 将总浓度为2 代小鼠。获得阳性转基因小鼠后，通过转基因小鼠之间杂交或者与阴性小鼠杂交，获得F1和F2代转基因阳 性小鼠。分别分离F2代转基因阳性小鼠的肺成纤维细胞、心肌细胞、肾细胞和脾细胞，2I]Dox诱导，通过 Western Blot检测目的基因SV40T和p53基因的表达，持续传代，绘制细胞的生长曲线和分裂曲线，检测细 胞中微管和微丝状态，通过透射电镜和扫描电镜观察细胞超微结构。 结果 因阳性小鼠，其中5只为转座子载体阳性，1只为转座酶阳性。经过繁育共获得转基因后代小鼠139只，其 中转座子阳性小鼠71只，阳性率为51．1％；转座酶阳性小鼠46只，阳性率为33．1％：双阳性小鼠为31只，阳 性率为22．3％，表明获得的piggybac介导的SV40T／p53转基因小鼠可稳定遗传。 分离转基因小鼠的肺成纤维细胞、，I、5,肌细胞、肾细胞和脾细胞，在体外加入Dox诱导后，通过Western 代，细胞形态规整，状态良好，生长趋势和分裂趋势正常；内部结构完整，包括微管、微丝以及细胞器结 构完整，是良好的基因功能和细胞功能研究工具。 i,3i仑 PiggyBac转座子是一种高效的转基因工具，转座效率高、操作容易，可根据科研和生产的实际需要对 载体进行改造以获得不同的转基因动物。SV40T是常用的细胞转化因子，可诱导细胞转化后，实现稳定传 代，而野生型的p53能,JJl：l强SV40T所诱导的细胞转化。在掌握诱导转基因小鼠细胞永生化的技术后，其中能 持续传代的脾细胞生长体系的建立，为其应用于生产无融合单克隆抗体技术奠定了基础。 致谢 支持。 132