辅助性T细胞亚群在肝移植患者术后早期变化地研究.pdfVIP

辅助性T细胞亚群在肝移植患者术后早期变化的研究 裴艳香郝建宇夏成青齐曼 首都医科大学附属北京朝阳医院 消化内科(100020) 目的 分析肝移植患者术后早期外周血中Thl／Th2细胞亚群的变化及其在免疫反应中的作用。 方法采用细胞内细胞因子免疫荧光染色和流式技术，在单细胞水平上检测11例未发生排斥反 应的肝移植患者外周血中Thl厂1112的动态变化。 结果肝移植术后早期未发生排斥反应患者的外周血中Thl／Th2在术后3天、1周及2周时与 反应。 关键词肝移植；免疫耐受；辅助性T细胞 目前，肝脏移植已成为治疗终末期肝病的一种有效方法。随着外科手术技术的完善，肝移植术 T 后免疫反应成了影响疗效的主要障碍。近年来，辅助性T淋巴细胞(helperlymphocyte，Th)在肝 移植术后免疫反应中的作用愈来愈受到重视。为进一步研究n细胞在肝移植术后的作用，我们对 11例肝移植术后早期未发生排斥反应的患者外周血中的Thl细胞及Th2细胞进行了动态监测，以观 察Th细胞的变化规律及机体细胞免疫状态的变化，为临床进行免疫干预治疗提供依据。 对象和方法 1．对象：选取2005年5月至2005年10月因肝炎肝硬化失代偿期于我院住院进行肝移植的未 发生排斥反应的患者，共入选1l例。其中男性8例，女性3例，年龄为35～55岁，平均年龄41．6 岁。受者术后服用免疫抑制剂FK506 0．1mg／Kg，剂量根据血药浓度调整：每12小时给骁悉(MMF) 以后逐渐减量。分别于肝移植患者术前、术后3天、术后1周、2周、3周采取外周静脉血2ml并用 肝素抗凝，备用。 2．主要试剂：PMA(phorbol12一myristate Solution、PE标记IL-2抗体及PE标记Ⅱ，4抗体均购自美国B．D公司。 素、permeabilizing DICKSON 主要仪器：C02孵育箱为美国产，型号：BB5060；流式细胞仪：为美国BECTON 公司生产的FACScalibur型产品。 3．全血细胞刺激培养： 取1只试管，向管中加入细胞因子的刺激剂PMA 0．7ul 25ng、Ionomycinlug及膜封闭剂Gogistop 4．CD4W细胞获取： 向两只试管中分别加入iOulFITC标记鼠标人CD8抗体，10ul Percp标记鼠标人CD3抗体。再 各加入50ul孵育后的抗凝外周血，混匀，室温下避光孵育15分钟，加入lml溶血素后混匀，避光孵 育10分钟，离心5分钟(1000转／分)去上清，CD3+D8．T细胞即为CD4+T细胞。 5．Thl亚群及Th2亚群的标记： Solution 0．5ml(与蒸馏水1：9稀释)混匀后避光 向上述两试管中加入膜通透剂permeabilizing ·205· 入10ul 2ml PE标记几．2抗体，和10ulPE标记Ⅱ，4抗体，混匀，室温下避光孵育30分钟，加入PBS 离心(5分钟、、1000转，分)去上清，分别向试管中加入300ulPBS避光待测。 6．流式细胞仪细胞检测： 用流式细胞仪检测，检测样本前用BD公司标准Beads校准流式细胞仪，使CV值在2％以内。 细胞(即几-4抗体标记细胞)的百分数，并计算Thl细胞与Th2细胞比值。 表示差异有显著性意义。 结果 肝移植术后早期无排斥反应者的外