分泌性人核糖核酸酶抑制因子对B16黑色素瘤基因治疗的探究.pdfVIP

分泌性人核糖核酸酶抑制因子对B16黑色素瘤基因治疗的研究 盛甫秀”，陈俊霞，于丽华，崔秀云e (大连医科大学生物化学与分子生物学教研室， 辽宁大连116027) [摘要]目的：观察分泌性人核糖核酸酶抑制因子对肿瘤生长的影响。方法：将小鼠免疫球蛋白IBG的信 号肽序列与人核糖核酸酶抑制因子序列相连后重组到逆转录病毒载体中。扩增培养，将收集的重组病毒 注射到荷B16黑色素瘤的小鼠体内，观察其对肿瘤组织中新生血管数量及对肿瘤生长速率的影响。结果： 所构建的重纽裁体经酵切鉴定符合预期目的。感染包装细胞后可产生复制缺陷的重组稿毒。该病毒注射 荷B1 小鼠免疫球蛋白IgG信号肽可以有效诱导人核糖核酸酶抑制因子的分泌。分泌性人核糖核酸酶抑制因子 可抑制肿瘤组织中新生血管的形成从而抑制肿瘤的生长。 B1 [关键词]分泌性核糖核酸酶抑制因子；信号肽；逆转录病毒载体； 6黑色素瘤；基因治疗 Inhibitor， 核糖核酸酶抑制网子(RibonucleaseRI)是一种胞浆内酸性糖蛋向，分于量约为50kD。 A， RNase J。 RI是核糖核酸酶A(RibonucleaseA)的抑制剂，可以有效地抑制其对RNA的水解作_l_}ju A的氨基酸有着高度保守的同源顺 A超家族的一员，在组织和细胞中的分布十分』。泛川。Ang与RNase 和转移是必须的卜“：并且外源性限制血管的生成可以明显地抑制肿瘤的生长，甚至可以使肿瘤消退。 但是，Rl在生理状态r是一种胞浆蛋白，这使得它利作为分泌性蛋白发挥功能的Ang的结合受到一 载体。用脂质体法将其转入包装细胞系PA317中，并筛选出高滴度的产毒细胞株，进一步的探讨Rl在抗 血管的基因治疗中的作_}}_J。 l实验材料 cell line由 本室保存。C57BL纯系小鼠，体重20Og左右，由天津血液研究所引进。 低萜DMEM培养基购自ClonTec公司，Trizol购白Sigma公司，抗人RIIgG本室制备，碱性磷酸酶 标记的羊抗兔抗体承INBT／BCIP染色试剂盒购白华荚生物工程公司。 I、ClaI、HindUl，DNAkit、DNA Kit、BAPKit、PCRKit、 限制性内切酶Spe ligation blunting RNAPCR BRL公司产品。 (Genetiein)为GIBCO 2方法 2．1 重组逆转录病毒载体的构建 21．1 RI基因的扩增 I限制行内切酶位点ACTAGT，得 及’r游引物P1，P2并在TAKARA公司合成。上游引物N端引入Spe 到一长度为24bp的引物：Pl J限制性 1．COm t： E-m引l：sfx482@hottaal 作者简介：盛甫秀(1978一)，t≯i E dlmeduCD ★通讯作者：杜秀西教授Tel：0411llail：cuixy@mailndu 247 内切酶位点ATCGAT得到一长度为26bp的引物：P2 产物与T载体相连，并命名为pSFX001。 2．1．2小鼠IgG信号肽的合成 合成。在其N端引入Hind=