钙调神经磷酸酶在创伤性轴突损伤中的作用及机理.pdfVIP

第三军医大学博士学位论文 钙调神经磷酸酶在创伤性轴突损伤中的作用及机理 摘 要 弥漫性脑轴突损伤(Dif．fuse ? 伤，是非火器颅脑损伤中最严重的颅脑损伤之一。虽然随着影像学的发展，DAI的临 床诊断有了一些进步．，但在治疗方面尚无有效手段。 DAI的发生是由于外力直接或间接作用，神经组织损伤后的继发改变和损伤后修 复反应等诸多因素共同介入的结果。但究其发生的生物力学机理而言，它应该是所有 Axonal 的创伤性颅脑损伤的共同特征，因此也被称为创伤性轴突损伤(Traumatic 会直接离断，即离断型轴突损伤；同时，当原发性损伤不足以引起轴突离断时，即存 在非离断型轴突损伤。但是，随着继发性损伤的参与，部分非离断型轴突损伤在4～ 24h后也会转变为离断型轴突损伤。因此，保护非离断型轴突损伤的轴突，促进其自 我修复，促进轴突再生无疑是治疗TAI的重要策略。 蛋白磷酸酶，在细胞信号传递中直接受Ca2+的调节，起脱磷酸化作用。它是脑内含量 最高的蛋白酶之一，主要分布在神经元胞体和轴突、树突中。作为一种胞内信号蛋白， 目前研究发现CaN在中枢神经系统参与了许多神经细胞功能的调节：如免疫炎症反 应、突触可塑性、神经元凋亡等。而CaN在创伤性轴突损伤中的作用也日益引起人们 A， CsA)或FK．506，反映前向转运障碍的1AI指标一一APP(amyloidprecursor 的阳性染色轴突会减少，动物的运动功能有所改善，间接证明CaN参与了TAI的发生、 确切的作用和机理有待于更深入的研究。 不同年龄段大鼠皮层神经元CaN的活性变化，探讨CaN与轴突再生能力的相关性； 2)培养大鼠大脑皮层神经元，在3、7、10d分别给予10nMCsA、10nM III．tubulin、 TTM(PP．1的抑制剂)后，检测神经元的神经突起的长度、CaN的活性、D 6 第三军医大学博士学位论文 CsA、10nMTTM 张损伤大脑皮层神经元构建轴突损伤模型，在损伤后分别给予10nM 后，1h、6h、24h、3d观察神经元形态改变，检测CaN的活性、APP、p 蛋白表达， 进一步探讨CaN在轴突牵张损伤后对轴突的作用以及机理。 本课题的主要结果和结论 1．酶底物显色法检测发现：随着大鼠年龄的增加，其大脑皮层的CaN活性呈逐 步增加的趋势。这可能是成熟神经元与未成熟神经元自我修复能力差异存在的线索。 而影响其后续效应。 3．相差显微镜下数码采集细胞生长照片，SPOT软件分析：神经元突起的长度在 以CsA的上述作用可能是通过PP．1进行的。 4．Westem 0d blot检测发现：D 的刺激却只使D 的磷酸化而影响轴突生长，还能通过PP．1、CI也B发挥间接影响。 过程，是目前体外研究TAI较理想的模型。它具有操作简便、损伤条件控制精确、重 复性好等优点。 6．SPOT分析、Westem 显。 7．Westem blot检测还发现：D