生物化学 教学课件 作者 刘群良 主编 第十八章.ppt

尚辅网 尚辅网 第十八章 重组DNA技术 第一节 重组DNA技术的重要工具酶 一、限制性核酸内切酶 二、其他重要工具酶 一、限制性核酸内切酶 1. 限制酶的分类 2. 限制酶的命名 3.限制酶的识别位点 1. 限制酶的分类 2. 限制酶的命名 3.限制酶的识别位点 3.限制酶的识别位点 二、其他重要工具酶 第二节 重组DNA技术常用的载体 一、载体的分类 二、常用的载体 一、载体的分类 二、常用的载体 1. pMD18-T质粒载体 2.pCMV-Myc质粒载体 3.λ噬菌体 1. pMD18-T质粒载体 2.pCMV-Myc质粒载体 3. λ噬菌体 3. λ噬菌体 第三节 重组DNA技术常用的基本原理 一、目的基因的获取 二、目的DNA与载体的连接 三、重组DNA导入宿主细胞 四、重组DNA的筛选与鉴定 五、重组DNA在宿主细胞中的表达和调控 一、目的基因的获取 1. 化学合成 2. 基因组DNA文库 3. cDNA文库 4. 聚合酶链反应 1. 化学合成 2. 基因组DNA文库 3. cDNA文库 4. 聚合酶链反应 二、目的DNA与载体的连接 ㈠ 粘性末端连接 ㈡ 平头末端连接 ㈢ 同源多聚尾连接 ㈣ 人工接头法 ㈠ 粘性末端连接 ㈡ 平头末端连接 ㈢ 同源多聚尾连接 ㈣ 人工接头法 三、重组DNA导入宿主细胞 四、重组DNA的筛选与鉴定 ㈠ 直接选择法 ㈡ 限制酶切鉴定 ㈢ PCR筛选重组体 ㈣菌落原位杂交 ㈠ 直接选择法 ㈡ 限制酶切鉴定 ㈢ PCR筛选重组体 ㈣菌落原位杂交 五、重组DNA在宿主细胞中的表达和调控 ㈠ 重组DNA在原核细胞中的表达 ㈡ 重组DNA在真核细胞中的表达 ㈠ 重组DNA在原核细胞中的表达 ㈡ 重组DNA在真核细胞中的表达 第四节 重组DNA技术在医学和制药工业中的应用 1. 生产蛋白质类药物 2. 疫苗生产 3. 基因治疗 1. 生产蛋白质类药物 2. 疫苗生产 3. 基因治疗 尚辅网 尚辅网 图18-8 同一限制酶切割位点连接 尚辅网 图18-9 不同限制酶切割位点连接 尚辅网 尚辅网 尚辅网 图18-10 同源多聚尾连接 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 图18-13 α-互补筛选 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 * 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 图18-5 建立基因组DNA文库的基本过程 尚辅网 尚辅网 尚辅网 图18-6 建立cDNA文库的基本过程 尚辅网 尚辅网 * * * * *