Sol-gel法固定化脱氢酶催化CO-%2c2-合成甲醇研究.pdfVIP

Sol—gel法固定化脱氢酶 催化C02合成甲醇研究 陆扬许松伟姜忠叉 (天津大学化工学院，天津30072) 摘要：COz在甲酸脱氢酶、甲醛脱氢酶和甲醇脱氡酶3种酶的催化作用下，经3步反应可 转化为甲醇。f本文主要采用溶胶一凝胶法对甲醛脱氢酶进行固定化，并研究了游离和固定化醛脱 氢酶酶促反应的动力学。游离和固定化醛脱氢酶酶促反应都符合lbazid双底物酶促反应动力学模 型，固定化后的酶活为同条件下游离酶活性的50％左右。固定化酶能重复使用5次以上。) 关t词：溶胶一凝胶固定化醛脱氢酶NADH二氧化碳甲醇 I 前言 为消除温室效应给全球气候带来的影响和解决碳资源危机，C02的固定和再利用一直是 科研工作者关注和研究的热点问题之一。C02在甲酸脱氢酶(formate dehydrogenase，FateDH)、 甲醛脱氢酶(fom圳ehyde dehydrogenase，FaldDH)和甲醇脱氢酶(alcoholdehyogenase，ADH)3 种酶的催化作用下，经3步反应可转化为甲醇，即(1)c02在FateDH作用下转化为甲酸；(2) 甲酸在FaldDH作用下转化为甲醛；(3)甲醛在ADH作用下转化为甲醇，见图1。前期研究 中，采用溶胶一凝胶法(sol一斛)将3种脱氢酶同时包埋于Si啦凝胶中，成功地实现了上述 转化反应，整个反应过程在常温、低压、接近中性pH条件下进行，且对环境无污染l】J。本 文以第(2)步反应为研究对象，采用sol一黛d法，以正硅酸乙酯(1EOs)为前驱体固定化Fald— DH，考察了固定化后酶促反应动力学和酶的反应话性，并与游离酶酶促反应进行了比较。 FkDH ‰DH ADH 嘛』竖}删』坚HcH0坐坠吼删 图1 coz转化为甲醇示意图 2实验 2．1试剂和仪器 甲醛脱氢酶附dDH(4．4U／rag)}ll p—NADH(si乎m)、甲酸(天津化学试剂一厂)、正硅酸 乙酯(天津化学试剂一厂)、XW一80A型微型旋涡混合仪(上海沪西分析仪器)、UV一2800型 基金项目：国家自然科学基金，天津市应用基础研究重点项目(033802411)，教育部跨世纪优秀人才培养计 划瓷助项目作者简介：艋杨(z982--)，男，硬士研究生，主要从事固定化酶研究 许松伟(1辨9～)．男，博士研究生。主要从事固定化酶研究 姜忠义(1966一)，男，博士，教授，博士生导师．主要从事蛋白质及酶工程研究，022蝴，帅E@ edu衄。 tiu ·947· Chrome)。 (惠普公司)、CHEMBET一3000型吸附仪(Quanta 2．2含酶凝胶制备 将2．60 gTEOS和1．5％的HCI溶液0，5509加入试管中，在旋涡混合仪上混合至均一溶 液，然后边混合边滴加1％的NaOH溶液1 059，混合物形成透明空白溶胶。取o．50raL空白 溶胶与0．50mL 7．0磷酸盐缓冲溶液)在塑料试管中混合，大约50～60s内 5vM酶原溶液(pH 形成含酶凝胶，取o．50mL空白溶胶与o．50mL空白溶液(pH7．0磷酸盐缓冲溶液)在塑料试 管中混合，大约90—120s内形成空白凝胶。将试管密封，4qC下静置老化7h，然后用0．1 mol／L磷酸盐缓冲溶液(pH7．O)浸泡老化后的凝胶，期间多次更换新鲜的缓冲液，并取样做 气相色谱分析，至无乙醇残留。 2．3酶促反应 7．0磷酸盐缓冲溶液 首先进行游离酶动力