多西环素和氟康唑联合抗白念珠菌生物膜的作用研究.pdfVIP

多西环素和氟康唑联合抗白念珠菌 生物膜的作用研究 高 媛 1孙淑娟2 1.山东大学药学院，山东济南2500122.山东省千佛山医院药学部，山东济南250014 摘要 目的 白念珠菌是临床上重要的病原性真菌，能够形成生物膜而导致对氟康唑耐药。本实验以微量稀释法 测定氟康唑和多西环素的联合抗真菌作用，以寻找克服白念珠菌特别是生物膜相关感染的方法。方法采用微量稀 释法测定氟康唑和多西环素联合对不同敏感性的白色念珠菌浮游菌的MICs和生物膜的SMICs，结果以A值进行判 断，将所得结果用非参数法FICI和△E进行分析，比较两种判定方法的一致性。结果 微量稀释法联合抗真菌作用 研究发现，对于浮游菌，多西环素与氟康唑联用对耐药和剂量依赖性敏感的白念珠菌表现出强大的协同作用。对于 生物膜，两药联用对各种敏感程度的白念珠菌经过各成膜时间(4，8，12h)形成的生物膜都具有协同作用。结论 多 西环素与氟康唑联用可对白念珠菌产生协同抗真菌作用，特别是对于耐药以及生物膜状态的菌株有效。 白念珠菌；生物膜；药物相互作用；氟康唑；多西环素 中国药理学会第十一届全国化疗药理学术研讨会论文集 115 材料与方法 一、材料与仪器 (一)菌株实验用白念珠菌均为临床分离株，经科玛嘉酵母显色培养基培养鉴定，保存于一70℃ 备用。按CLSIM27．A3方案测定其对氟康唑的敏感性”41。对氟康唑敏感的菌株编号为：CAl，CA5， 51。 CAl29。质控菌株为白念珠菌株ATCCl0231，其对氟康唑的MIC范围为0．5～1 mg／mL【1 (二)培养基酵母膏胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基(1％酵母膏，2％蛋白胨，2％葡萄糖，2％ 琼脂；鼎国生物有限公司，中国)；科玛嘉显色培养基(法国)；RPMll640(含L．谷氨酰胺，不含 碳酸氢钠，以MOPS缓冲液调pH至7．0；GIBCO，美国)。 (三)材料96孔平底平板(Costar，美国)；培养皿；试管。 Multiskan MK3，美国)；MMM．55L恒温培养箱(德国)； (四)仪器酶标仪(Thermolabsystems (五)试药及配制氟康唑(山东诚创医药技术开发有限公司)；多西环素(济南安贝卡商贸有 560 400 溶解，配制母液。氟康唑母液浓度为2 mg／L，多西环素母液浓度为6mg／L。 二、浮游菌MICs测定 M27一A3方 多西环素联合氟康唑对lO株白念珠菌作用的测定采用微量稀释法，实验参照CLSI X103 案在96孔板中进行。用RPMll640培养基调整每孔菌液的浓度为1cell／mL。将各药物母液 以RPMI CAl29和CAl37)，氟康唑的浓度范围是1-512 CAl5和CAl35)，氟康唑的浓度范围是O．03125～16 mg／L。生 mg／L。多西环素的浓度范围是0．5-32 h。用酶标 长对照孔中加入不含药物的菌液。制备完毕的96孔板放置恒温培养箱中，35℃培养48 仪在600am处测定4值进行结果判读[16]a与生长对照孔相比，使真菌生长80％受到抑制的最低药 物浓度作为MIC终点判读标准。实验重复3次。 三、生物膜SMICs测定