生物合成肽法与线性B细胞表位组学研究.pdfVIP

呼和j蠹特 第18次全嗣干捷素与细穗园予学术会议 生物合成肽法和线性B细胞表位组学研究 徐万祥1，王健‘，顾少华2，季朝能2，谢毅2，夏鸿鼹3 1上海市计划生育科学研究所，上海300032：2复旦大学生命科学院遗传所遗传工程溷家重点 实验室，上海200433；3上海业力生物科技有限公司，上海200032 一．前言 疾病相关和病毒靶抗原的线性B细胞表位扫描作图，一直是生物化学、免疫学、 病毒学、疫苗学帮转化医学等领域中一个持续不断的重要研究内容之一。由于通过抗 原抗体反应鉴定的表位(又称抗原决定簇)或抗原性肽是合成肽疫苗研制、临床诊断 试剂开发和抗体制备的基础，因此继本世纪初开始实施基因维学和蛋白质组学薪兴研 究领域之后，也提出了“抗原表位组学”和“抗体组学”研究方向(两者相辅相成，紧密相 关)。2004年，在上海相继召开的第43届“东方科技论坛”和“香山学术会议”上，国内 外相关著名学者都指出了抗原表位组学研究的重要性和紧追性(因为它将是比人类基 因组学和蛋白组学更为艰巨、更为宏大的重大生命科学计划)，呼吁我国相关科研人员 适时加入，以抢占这一新分支领域的制嵩点，抢占这方面更多的知识产权份额(因为 一个表位就是一项发明专利)。 二．改良生物合成肽法 经过10年左右的努力，我们最终完善了可用予线性表位组学研究的改良生物合成 默法改良要点：1)爱焉了截短的GSTl88蛋白作为短款生物表达的载体，达到无需纯 化表达融合蛋白，就能即便在使用抗重组蛋白多抗的场合，也能在免疫印迹鉴定中产 生清晰的ECL化学发光印迹条带；2)同时构建了仅表达GSTl88的对照质粒，从而可 肽编码DNA片段尾添加了TAA终止密码子，避免了市售重组表达质粒多克隆位点区 终止密码子前碱基编码4个或更多残基哥缝对免疫印迹结果的干扰；和4)使用了操作 更经济简便的热诱导细菌表达系统等。优点：简便、经济、结果可靠，适合普通生物 学实验室运雳。 三．线性抗原表位组学研究 鉴于我们用生物合成获法帮兔抗重组蛋自多抗的抗原表位组学研究结果，内容至 少应该包括三个目标：1)通过表位扫描作图，揭示一个或多个同源蛋白乃至一物种全 部编码蛋自的精缨完整线性表位组(epitome)；2)通过基于各鉴定表位最小基序的同 源蛋白序列比较，确定它们的保守性和特异性；3)发现解码的表位组中抗体中和性或 功能性表位。前二者目标已在人乳头瘤58型病毒(HPV58)三个主要蛋白E6、E7和 Ll的表位组学研究中予以实现，后者舀标也是完全可以想见的，因为通过制备基于各 精细表位的单抗或合成肽多抗，结合抗病毒中和实验就能实现(以往多以鉴定或计算 棍预测的一个抗原性肽开展这一研究)。 。ll8． 呼和清特 第18次全目干捷素与细胞因子学术会议 四．展望 虽然目前不清楚在干扰素和细胞因子领域有无开展线性抗原表位组学研究的可能 性及其意义，健在座的有从事病毒学特剐是流感瘸毒研究的著名院士专家，因此，希 望能有人感兴趣并共同参与向囡家有关科技部门建议，一起组织若干甲型流感病毒 线性抗原表位组学研究计划，因为像在第一个人类基因组草图完成后直接进行百人和 干人基因组测序项目一样，其若能在国内组织实施，能彰照中国独特的原创性科技水 平，研究结果也将产生更广泛深远的影响。 ．119．