时间分辨荧光免疫法筛选献血员HBsAg+地研究.pdfVIP

3 讨论 临床监测细胞免疫功能主要是通过流式细胞仪检测淋巴细胞群的功能 流式细胞仪在检测细胞时具有高灵敏 度 高效性及多参数分析的优点 它能对混合淋巴细胞群体中亚群细胞进行计数 且对血液中淋巴细胞免疫表型精 确检测 故被认为是血液淋巴细胞免疫表型分析的标准方法 淋巴细胞主要分为T淋巴细胞 B淋巴细胞和NK细胞 三大群 其中T淋巴细胞又可分为辅助性T细胞 Th 诱导性T细胞 Ti 抑制性T细胞 Ts 和细胞毒性T细胞 Tc 这些细胞在维持机体免疫平衡和免疫监视功能中扮演了重要角色 在使用流式细胞仪分析细胞亚群时 常 规方法为使用试剂盒推荐的抗体用量 我们为进一步探求抗原-抗体反应的最佳比例 采用了1 2 3 4 四种方法进 行比较 结果显示无显著性差异 有报道显示 每份标本T+B+NK 的数值应在95%-105%之间 我们采用的几种方法 即4种不同抗体用量所得结果亦与其一致 根据抗原-抗体反应的特点 只有抗原-抗体在最适比度时才会发生最佳反 应 如果标本细胞数太多 抗体量偏少就会染色不完全 导致结果偏低 若细胞数过少 就会造成抗体的浪费 本 9 次实验选择淋巴细胞数绝对值在0.8 4.0×10 /L 的患者 结果表明 减少荧光抗体量至2.5ul也能确保淋巴细胞都被染 色 对实验结果没有影响 由于荧光抗体试剂多为进口的单克隆抗体 价格极其昂贵 本实验的意义就在于节约了 荧光抗体试剂8倍 从而大幅度地降低了实验成本 为流式细胞检测技术在临床上的广泛应用起了极大地推动作用 对于淋巴细胞数高到何种程度还可以适当减少荧光抗体量而达到节约试剂之目的 我们正在观察中 时间分辨荧光免疫法筛选献血员HBsAg 的研究 奚经巧 叶 瑾 赵龙友 朱丰村 姜跃炜 温州市中医院检验科 325000 乙型肝炎病毒表面抗原 HBsAg 为乙型肝炎病毒 HBV 感染的主要证据之一 检测 HBsAg 是采供血机构 筛选献血员 防止HBV 经输血传播的重要措施 目前采供血机构普遍采用酶标记免疫检测技术 ELISA 法 但ELISA 技术对低水平存在的血清HBsAg 难以进行有效检测 可能导致HBsAg 阳性献血员的漏检 我们采用时间分辨荧光 免疫技术对 1200 份已通过二次 ELISA 检测结果为阴性的合格献血员血清标本进行 TRFIA 检测 对检测结果阳性 ≥0.2ng/ml 的样本进行中和确认试验 并与化学发光法 CLIA 方法进行比对 对 TRFIA 技术在献血员筛选工 作中应用意义作了研究分析 材料和方法 一 标本来源 收集2005 年6 月 2005 年12 月12 日某市中心血站合格献血员血清样本共1200 例 二 仪器及试剂 1 献血员筛查采用不同品牌试剂二次 ELISA 技术检测 HBsAg 试剂 1 为厦门新创科技有限公司产品 试 剂 2 为洛阳华美生物技术有限公司产品 分析仪器 2420 酶免分析仪 瑞士费米公司产品 2 TRFIA 技术分析仪器 ANYTEXT 2000 时间分辨荧光免疫分析仪为上海新波生物技术有限公司产品 试剂 为苏州新波生物技术有限公司产品 批号 3 化学发光法 CLIA 美国Abbott 产品 ABBOTT ARCHITECT i2000 检测 4 0.5ng/ml 1ng/ml 2g/ml 5ng/ml HBsAg 定值参比血清由卫生部临床检验中心提供 批号 200520 三 检测方法 1 ELISA 技术原理方法 按血站检测HBsAg 标准方法检测 分二次用不同品牌试剂进行 Cutoff 值计算 COV= 阴性对照平均OD 值*2.1 样本OD 值COV 为阳性 二次检测中只要一次OD 值COV 即被视为HBsAg 阳性 予 以剔除 其余为合格献血员 2 TRFIA 技术检测HBsAg 原理方法 双抗体夹心法 待测抗原与包被于在反应板上的单克隆抗-HBs 抗体结 合成抗 HBs-HBsAg 加入铕标记物抗-HBs-DTTA-Eu 后 与已结合在板上的 HBsAg 连接成抗-HBs-HBsAg-抗 HBs- DTTA-Eu 复合