嗜线虫致病杆菌对小菜蛾生物活性地研究.pdfVIP

嗜线虫致病杆菌对小菜蛾生物活性的研究+ 王勤英” 史翠红 宋 萍杨 君 冯姗姗孔繁芳 (河北农业大学植物保护学院，河北省农业病虫害生物防治工程 技术研究中心，保定071001) 摘要：嗜线虫致病杆菌HB310菌株(XenorhabdusnematophilaHB310)属于肠杆菌科、革兰氏阴 性菌，存在于昆虫病原线虫消化道前端的茵囊内，与小卷蛾斯氏线虫SteinernemaHB310互 carpocapsae 惠共生。嗜线虫致病杆菌HB310茵液对小菜蛾幼虫具有较强的口服杀虫活性，72h小菜蛾2龄、3龄 和4龄幼虫的校正死亡率分别达到100％、54．39％和50％，对2龄小菜蛾幼虫的LC，。是1．4×106 cells／ml。此外，该菌液对2龄和3龄幼虫均表现出明显的拒食活性。用亚致死剂量的茵液处理小菜蛾 2龄幼虫，存活幼虫的化蛹率、蛹重、羽化率、雌虫寿命以及成虫产卵量均明显下降。 关键词：嗜线虫致病杆菌，小菜蛾，杀虫活性，亚致死效应 小菜蛾[Plutclla 世界性的十字花科蔬菜重要害虫。因其适应能力强、年发生代数多、繁殖能力强，长期的药剂防 治，使得小菜蛾对使用过的及正在使用中的农药都产生了很强的抗性，包括生物源农药阿维菌素 和苏云金芽孢杆菌(Bt)¨。J。小菜蛾是田问发现的第一种对Bt产生抗性的害虫HJ，近年来在全 世界多个地方相继报道小菜蛾对Bt产生了抗性¨丙1。因此，寻找新的杀虫物质，开发新的生物杀 虫制剂已成为生物防治领域一个迫切的问题。 本实验室从昆虫病原线虫体内分离出一株共生菌——嗜线虫致病杆菌HB310菌株，前期研 究表明该菌株对多种昆虫均具有很强的胃毒活性，尤其是对小菜蛾和菜青虫的致死作用比较 强J，但是目前对其杀虫作用方式了解得不够全面，作用机理也不明确。本试验主要通过生物 测定，明确该菌对小菜蛾不同虫态的作用方式及致病力，测定共生菌亚致死浓度条件下对小菜蛾 幼虫取食量、生长发育以及成虫生殖的影响，为该菌的开发利用奠定良好的理论基础。 1材料与方法 1．1供试昆虫和菌株 嗜线虫致病杆菌HB310菌株(XenorhabdusnematophilaHB310)由害虫生物防治实验室分离 保存。小菜蛾(P．xylostella)由河北农业大学害虫生物防治实验室提供。 1．2菌液的制备 将保存的共生菌菌种画线于NBTA培养基平板上，在28℃培养36～48h，挑取I型菌单菌落 基中，在28℃、200rpm振荡培养48h，4℃保存备用。 1．3 HB310菌液对小菜蛾幼虫胃毒活性的测定方法 试验采用浸叶法：将新鲜的甘蓝叶碟在原菌液(含0．3％吐温一80)中浸渍大约10s，取出 后自然晾干，然后放人直径为9．5cm的培养皿中，每皿分别接人lO头小菜蛾2龄、3龄和4龄 幼虫，每个处理分别重复3次，每个重复接虫20头，以加0．3％的吐温一80的无菌水作为对照， 然后置于26。C±1℃、14h光照培养箱中培养，48h和72h后记录死亡虫数，计算死亡率和校正 死亡率。 学重点基金(9816)。 }$通讯作者，E—mail：wqinying@hebau．edu．cn。 293 昆虫学研究动态 菌液小菜蛾2龄幼虫的Lc铀测定：将原菌液用无菌水以5倍的梯度逐级稀释配成6个浓度梯 度，以无菌水为对照，每个处理50头幼虫，按上述方法进行生测。 1．4 HB310菌液对小菜蛾幼虫拒食作用的测定方法 10s，对照叶在牛肉汤培养基中浸渍10s。选择性拒食试验中，将2枚处理叶和2枚对照叶交错排 列，放置在直径为9．5cm的培养皿中，每皿分别接人5头小菜蛾2龄和3龄幼虫，置于25℃± 1cC、14h光照培养箱中，24h取出剩余叶片，用坐标纸测量取食面积，每处理4次重复。非选择 性拒食试验方法类似选择性拒食试验，但每个培养皿中的4枚叶均为同一处理叶或对照叶，24h 时测量取食面积，并按下式计算拒食率。 (1)选择性拒食率(％)=(对照取食面积一处理取食面积)÷(对照取食面积+处理取食面 积)×100％。 (2)非选择性拒食率(％)=(对照取食面积一处理取食面积)÷对照取食面积X100％。 1