天然药物抑制病毒外壳蛋白和叶绿体结合的研究.pdfVIP

．276． 农药与环境安全国际会议论文集 天然药物抑制病毒外壳蛋白与 叶绿体结合的研究 侯玉霞。 李重九 张文吉 (中国农业大学理学院，北京100094) 摘要植物病毒病严重危害着农业生产。某些天然药物能够抑制被病毒感染的植物产生症 状，使其正常生长，进而达到防治病害的目的。因此，开展天然药物对感病寄主病生理的调控的研 究，以寻找新型的既有抗病毒活性又可调控感病植物生理状态、使其健康生长的抗植物病毒剂。 以TMV／烟草为测试体系，研究了8种天然药物的抗病毒作用方式。其中SYZJ、HQS、GSJL 不同程度地抑制了TMV-CP与类囊体膜的结合。使感病烟草叶绿素增加，促进了光合作用，调控 感病烟草向健康方向生长。 关■谰 天然药物TMV外壳蛋白叶绿体 螺旋。TMV的寄主有33科236种，可以经过人工接种加以证明。TMV侵染的寄主出现的特 系感染的烟草比TMV弱株系感染的烟草多出5～10倍的TMV—CP累积在叶绿体，导致了花 到抑制o“]。1992年Banerjee等成功地把烟草花叶病毒输入到叶绿体中”]。 综上所述，我们在离体条件下研究TMV—CP快速输入叶绿素体中，证实TMV·CP与叶绿 体膜结合，从而筛选出抑制TMV—CP与叶绿体膜结合的抗植物病毒剂，使农作物即使被病毒 侵染，也不产生症状，不影响农产品的质量和产量，以达到防治病毒病的目的，成为一条研究抗 植物病毒剂的新思路。 l材料与方法 1．1病毒来源 烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus，TMV)，在普通三生烟上增殖3周后，采用Good— ing＆Hebert的方法提纯，由电子显微镜检查其纯度。 1．2供试生物材料 tabacumL．CV．“samsun”) 普通三生烟(Nicotiana 通讯联系人．电话，86一10E—mail：houyuxia@tsinghua．org．cn 农药奋成、加工、分析与毒理 ·277‘ 1，3侯试必然药剂 HQs，GGS，GSJL，HPS，SYSJ，LDS，QSS，BLG 1．4主要仪器殛试剂 夹芯式垂直电泳槽，CS一920薄层翻描仪(日率岛津)，HZQ—C空气浴振荡器，uV—190分光 光度计等。 R—lo)翻果获懿(Mater 试蓑：繇援蛋鑫瓣(Thermolysin)(Sigma)、纤维素黪(0nozuka ozyme 1．s完整游离舛绿体的制备 细慈撩浮液经避分离原擞质谇酶涟(1籍纤维素酶、0．1％离轿酶、0．4mol／L嚣攥醇)在 28C酶解2h后，得到原生脯体溶液，再经过20pm尼龙膜过滤6次后释放出叶绿体，离 心(1500 mol／LSorbitol，2mmol／LEDTA，1mmol／L g，1rain)，耀悬浮演(O．33 MgCl2， 1mmol／L MnCl2，50mmol／LHepes—KOH，0，2％BSA，5mmol／LNa4P207，10mmol／L Naiso—ascorbate NaHCOa，2mmol／L pH7．6)冲洗叶绿体沉淀表面1次，加少许悬浮叶绿体， 500 缝蔗糖不连续梯度(10鲻，20％，40嚣，80％)在3 g离·§15min，获离心警绷嚣琅凼4。瓤专 80％之间的一层叶绿体，即为完整的叶绿体，叶绿体的完整性或有无杂质通过相差艘微镜检 测，然后用提取液悬浮叶绿体沉淀，使吸光值A260rim到2．0。 1．6卧缭体类囊体簇翦澍备 叶绿体在冰箱中(4℃)预冷30 min，然后将叶绿体放人抽提缓冲液(o．3mol／L蔗糖，0．01 mol／LKCl，0，05