通过获得链霉素抗性基因(str)突变株筛选梅岭霉素高产菌株.pdfVIP

48 基础徽生物学 通过获得链霉素抗性基因(str)突变株筛选 梅岭霉素高产菌株 涂国全1刘 蛛2黎循航3 (江西农业大学生构工程系 江西 南昌 330045) 摘 蔓：本文通过链霉素对梅岭霉素(Meilingmycin)产生茁南昌链霉菌Ns一41—80菌株孢 子致死浓度的测定，采用诱变荆EMS四种不同诱变剂量对菌株的孢于进行诱变处理，诱变处理 的孢子涂布在古链霉素致死浓度的高氏平板上，获得了大量的链霉素抗性基因(str)突变株．然后 从链霉素抗性基因突变株进一步筛选到梅岭霉素高产茁株肿一5．11--221，在摇瓶条件下，只产 梅岭霉素不产南昌霉素，棒岭霉素活性单位选1500／-g／ml，比出发菌株NS一41—80的摇瓶发酵单 位855#g／ml提高丁77-9％，该茁株连续传代六代进行摇瓶发酵．其Fl代和F·代梅崎霉素发酵单 位稳定．F．代至F·代随着传代散增加．其梅．争霉素发酵单位急连下降．通过EMS诱变剂量分别与 抗药性突变率和链霉紊抗性基因突变株产梅蛉霉素产量的产势统计分析表明．菌株抗药性突变 与产素突变密切相关．产素突变的EMS诱变荆量高于链霉素扰性基因突变诱变剂量．在0-03M 的EMS荆量作用下，菌株致死率为99．43“，而抗药性突变率为0．0440“，t立丁梅岭霉素产生 茁链霉素抗性基园突变筛选方法，为南昌链霉菌高产菌种选育研究作了有盏矗勺尝试·井有助于其 它链霉茁属的抗生素产生曹育种研究． *镀谓：南昌链霉菌；梅蛉霉素l链霉素抗性基因突变肺选 O前言 江西农业大学微生物教研室从校园油茶根际土壤中分离筛选到一株产杀虫抗生索的链 霉菌新种——南昌链霉菌(Streptomycesnanchangensis)o’，通过与中科院上海药物研究所 合作研究证实，南昌链霉菌发酵产物中能产生多种杀虫活性物质，经TLC薄层层析检测·其 中A、B、C、D四个组份有较强的杀虫活性。首先，分离提纯了A组《；}，根据其A组份的紫 外、红外、接磁共振谱和质谱测定结果表明，A组份为一典型的聚醚类抗生素，其化学结构与 然后又从南昌链霉菌发酵产物中分离提纯B组份，经HPLC高效液相色谱检测表明，发现B 组份本身是一多组份的复合物，其中有B。、B外Bs、B。的TLC行为非常接近，分离提纯B-组 份为无色片状结晶，分子量为626(质谱法)，分子式为Ca。Hs。0，，再经H1核磁共振谱、C”棱磁 迎接2l世纪西部太开发暨徽生袖教学料研和成果产业化研讨奢 49 共振谱、H1一H1二维相关谱、H1--C”二维相关谱、质谱的分析和结构推导．确定了B1是一种 十六元大环内酯类化合物，它的母核与当今世界著名的广谱驱虫抗生素——阿维菌素 (Avermectins)相同而侧链结构完全不同，因而是中国国内发现的一种广谱高效的世界新 996年 索，命名为梅岭霉紊(Meilingmycin)“’简称M．B。梅岭霉紊于1992年申报国家专利，l 正式获得中国发明专利权，该专利技术于1999年12月由江西农业大学转让到山东胜利股份 有限公司，由该公司投资进行产业化开发。 南昌链霉菌野生菌株产梅岭霉寨很低，约25单位，经理化因子诱变筛选，所选育出来的 菌株梅岭霉紊发酵单位达300单位，提高了11倍，但由于该菌株发酵时既产南昌霉寨又产梅 岭霉索，能量代谢分散，难于提高其悔蛉霉素的产量。我们应用分子育种中关于抗生寨产生 菌抗性基因与抗生素合成的结构基因和调控基因紧密连锁而易发生共突变(co--mutation) 理论“3．在对诱变出发菌株的孢子进行抗链霉寨致死测定的基础上，采用化学诱变剂甲基磺 酸乙酯(EMS)进行诱变处理，使诱变的孢子的DNA产生高频率突变，然后将突变的孢子涂 布在含有链霉素致死浓度的培养基平板上进行培养，获得链霉紊抗性基因(str)突变株来筛 选梅岭毒素高产菌株。本文报道这一研究结果。 l材料和方法 1．1材料 1．1．1菌种南昌链霉菌(Streptomyces 子分离纯化传代获得，作为研究的出发菌株。 1．1．2培养基 1．1．2．1斜面、平板和茄子瓶培养基：高氏培养基。 1．1．2．2种子