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色谱质谱联用技术 色谱质谱联用技术 色谱分析的概述 1）按物理状态分类 根据流动相的物态：气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC) 根据固定相的物态：气-固色谱法、气-液色谱法、液-固色谱法、液-液色谱法 2）按使用的形式分类 (1)柱色谱 (2)纸色谱 (3)薄层色谱 3）按分离机理分类 (1)吸附色谱 (2)分配色谱 (3)离子交换色谱(4)凝胶色谱 2、色谱法的特点 1) 高选择性 2) 高效能 3) 高灵敏度，适于微量和痕量分析 3、色谱法的应用 1) 色谱分析广泛应用于极为复杂的混合物成分分析 2) 液相色谱法，在糖类、氨基酸、农药、染料、贵金属、有机金属化合物等方面得到了广泛的应用。 3) 色谱分离是一种非常有效的提纯物质的技术,常用于制备分离，得到高纯样品。 4) 色谱—质谱联用仪已成为研究分子结构的重要手段。 4、几个色谱常用术语（以气相色谱图为例） 1）色谱图 各组分的浓度随流出时间而分布的曲线称为色谱曲线，常称为色谱曲线图或色谱图。 2）色谱峰的高度、宽度、半峰宽度 峰高(h)：峰高h指色谱峰最高点到基线的距离，一般用cm为单位。峰宽(Y)与半峰宽[Y1/2) 从色谱峰两侧的转折点(拐点)作切线，在基线上的截距叫峰底宽(y)；简称峰宽；峰高一半处色谱峰的宽度叫半峰宽(y1/2)。由于色谱峰顶呈圆孤形，色谱峰的半峰宽并不等于峰底宽的一半。 3)保留时间(tR):是指被测组分从进样开始到柱后出现浓度最大值时所需的时间。 调整保留时间(tR′)：组分的保留时间与死时间的差值： tR′=tR-t0 它表示与固定相发生作用的组分比载气在色谱柱中多滞留的时间，实际上是组分在固定相中所滞留的时间。 二，气相色谱仪 1、GC的分析过程 ?1）气相色谱主要利用物质的沸点、极性及吸附性质的差异来实现混合物的分离。待分析样品在汽化室汽化后被惰性气体带入色谱柱，柱内含有液体或固体固定相，由于样品中各组分的沸点、极性或吸附性能不同，每种组分都倾向与流动相和固定相之间形成分配或吸附平衡。 2）由于载气的流动，使样品组分在运动中进行反复多次的分配或吸附或解析，结果在 载气中分配浓度大的组分先流出色谱柱，而在固定相中分配浓度大的样品后流出。 当组分流出色谱柱后，立即进入检测器。检测器能将样品组分的存在与否变为电信 号，电信号的大小与被测组分的量或浓度成比例。 GC的分析流程图 2、气相色谱仪的构成 ? 气路系统 ? 进样系统 ? 柱系统 ? 检测系统 ? 计算机控制及数据处理系统 检测系统 检测器是色谱仪的“眼睛” ?气相色谱检测器可分为浓度型检测器与质量型检测器：浓度型检测器的响应值和组 分的浓度成正比，质量型检测器的响应值和单位时间内进入检测器的质量成正比。 常用的浓度型检测器有：热导池检测器(TCD)、电子捕获检测器(ECD) 常用的质量型检测器有：氢火焰电离检测器(FID)、火焰光度检测器(FPD) 3、分离条件的选择 3.1载气及流速的选择 热导池检测器常用氢气、氦气作载气 氢火焰检测器宜用氮气作载气。氢气：空气：氮气的比例为1：10：1，如氢气30～40ml/min,空气300～400ml/min ,氮气1-3ml/min。 3.2柱温的选择 柱温改变时，柱效率、分离度R、选择性及色谱柱的稳定性都将产生相应的改变。 3.4进样时间和进样量的选择 1)进样速度必须很快 2）最大允许进样量应控制在使峰面积或峰高与进样量呈线性关系的范围内。 4、气相色谱分析 4.1气相色谱的定性方法 依据：利用色谱图确定各色谱峰所代表的化合物。 常用的方法：纯物质对照定性、利用保留值定性、利用检测器的选择性定性等。 4.2定量计算方法 归一化法、外标法、内标法等 1）归一化法 归一化法很直观，容易接受，计算简便、准确，当操作条件如进样量、流速等发生变化时，对计算结果的影响很小，是一种常用的计算方法。缺点是：必需所有组分都出峰。 2）外标法 利用标准品做标准曲线，在线型范围内，求得样品的浓度的一种定量方法。 3）内标法 当只需测定试样中某几个组分，或试样中所有组分不可能全部出峰时，可采用内标法。 内标法是将一定质量的纯物质(非被测组分的纯物质)作为内标物，加入到准确称取的试样中，根据被测物质和内标物的质量及其在色谱图上相应峰面积之比，求出被测 组分的质量分数。 选择内标物应遵循的原则： 试样中不存在的纯物质，否则会使色谱峰重叠而无法准确测定试样的色谱峰面积； 内标物的物理及物理化学性质应与被测物相近，当操作条件发生变化时，内标物与被测物均受到相应的影响。两者相对校正因子基本不变； 色谱峰位于被测物色谱峰的附近，且能与被测物色谱峰完全分离； 内标物的浓度应与被测物的浓度相近。 内标法的优点：不要求各组分全部出峰，无归一化法的限制，即只要