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用纳米二氧化硅包裹蛋白质的方法探究 杨宇，杨小伟,叶张梅，曹傲能* （上海大学纳米化学与生物研究所，上海市，200444） 摘 要：近来研究表明纳米二氧化硅包裹蛋白的包裹率严重依赖于被包裹蛋白的等电点（pI ）。带负电的蛋 白（pI 7 ）由于静电排斥很难被同样带负电荷的纳米二氧化硅颗粒包裹且极易泄漏。我们采用了非共价 连接包裹和共价连接包裹两种不同的方法利用纳米二氧化硅成功的包裹各种蛋白质。非共价连接包裹 法：我们在蛋白质 C 端加上了组氨酸标签，并在广泛使用的反相微乳液体系中加入微量的钙离子，通过 钙离子与蛋白质上的组氨酸标签之间的络合作用成功地将各种蛋白包裹在纳米二氧化硅内。共价连接包 裹法：我们首先将蛋白质上的羧基与 APTS 一端的氨基进行共价连接，然后 APTS 与蛋白质连接的产物以 共价连接的方式包裹在的纳米二氧化硅内。由于二氧化硅的包裹，固定了蛋白质并且增强了蛋白质的稳 定性。该方法在药物的载带，荧光探针及其酶的固定化中有极其广泛的应用。（其中我用纳米二氧化硅包 裹蛋白应用在酶的固定化中的应用作为共同作者已在 nanoscale 上发表）。 关键词：蛋白质；纳米二氧化硅；共价连接；非共价连接 Facile Method To Encapsulate Proteins in Silica Nanoparticles Yu Yang , Xiaowei Yang , Zhangmei Ye ,Aoneng Cao* (Institute of nanochemistry and nanobiology, Shanghai university, Shanghai, 200444.) Abstract: a recent study has shown that non-covalent encapsulation of a protein in silica NPs is critically depended on the pI value of the protein. Negatively-charged proteins (pI7) are difficult to be encapsulated and easy to leak out of silica, because of the repulsion of the negative charges on silica NPs. To overcome this problem, we used non- covalent encapsulation method and covalent method to encapsulate Proteins in silica NPs. Non-covalent encapsulation method: we added a His-tag to the C-terminal of the enhanced proteins and modified the widely-used conventional reverse microemulsion method by simply adding a small amount of calcium ions. Covalent method: To covalently entrap proteins in silica NP, we pre-treated proteins by attaching (3-aminopropyl) trimethoxysilane (APTS) groups to –COOH groups on the surface of EGFP. The APTS-EGFP was then encapsulated in silica NP by