血红素类蛋白在二氧化硅表面吸附地ATR研究.pdfVIP

篁垄曼全里皇坌堑丝堂兰查叁墼迨窭塑萋叁 曼堡竺皇坌堑些兰!鱼塑墨堡窒! B5／I 血红素类蛋白在二氧化硅表面吸附的ATR研究 王翠红，杨晨，夏兴华+ (南京大学化学化：I：学院，南京210093) 生命分析科学是当今分析科学研究的重点之一。血红素类蛋白，如血红蛋白(Hb)、细胞 c)是生命体系中电子传递链的一个环节，在血液循环、消化系统中起到输送氧气 色素c(Cyt 和营养成分的作用。在生物样品的理论研究过程中，首先应该保证这些蛋白质分子是具有生物 活性，具体的实验表征可以用FTIR光谱来实现。但是对于溶液样品，用常规的透射红外却无 法进行，所以采用衰减全反射的方法【lJ，使得红外光线在光窗表面发生全反射，所检测的反射 光携带有表面物质的分子信息，从而实现溶液样品的红外测定。 我们采用自己改进的衰减全反射(ATR)光路系 统(如图1)来研究血红素类蛋白质分子在单晶硅光 窗表面的非特异性吸附12】。通常情况下，单晶硅表 面很容易被氧化为二二氧化硅薄层，具有很好的生物 相容性，从而可以研究蛋白质分子的吸附特性。当 7．0的PBS缓冲溶液，蛋白质分子中的氨基 选择pH 酸与二氧化硅发生相互作用，形成单分子层吸附， 同时在吸附单层分子上发生物理吸附。对于单次内 反射。入射光在垂直光窗表面上衰减分量的穿透深 度小于50nm，而单个蛋白质分子小于10nm，所以 ATRschematic Fig．1 illustrationofthe moleculeson 衰减分量大约可以穿透几个单分子层，这样我们检protein singlecrystal 8111con。 测到的发射光就具有表面吸附蛋白的分子信息。 我们考察了0．2mg／mL血红蛋白(Hb)分子在二氧化硅的吸附特性。如图2所示，随着吸 附时间的增加，Hb分子的吸收峰强度也逐渐增加，表明Hb分子在光窗上的吸附量是一个缓慢 的过程。当吸附时间超过30min后，其红外信号趋丁：稳定，说明Hb在光窗上的吸附趋于饱和 吸附量。图中蛋白质分子所特有的酰胺平面在1687cmJ处的红外吸收(酰胺平面中amideI键的 b型旋转模式的C=O伸缩振动)对应于蛋白质分子中14--19及67—70残基：1649cm一的吸收 峰(为arnide 残基。肩峰的出现表明Hb分子具有不同的二级结构；在1533 cm。1的吸收峰是amideII的b型 旋转模式或酪氨酸在酰胺平面环中的CN的伸缩振动或N．H的平面弯曲；在1432cmd处的红 外吸收峰则对应于氨基酸分子CH2和CH3的C．H弯曲振动，而1281 cm‘1处的红外吸收属酰胺 第九届全国电分析化学学术会议论文摘要集 B传统电分析化学(含机理研究) 平面amide III的振动模式。在饱和吸收研究的基础上，我们考察了不同浓度的Hb分子吸附吸 附20min后的红外结果，发现其光谱信号与蛋白质溶液的浓度成正比关系。 为了对比血红素类蛋白在光窗上的吸附特性，我们考察了O．2 c的红外光谱与吸 mg／mLCyt 附时间的关系。结果发现CytC分子在15rain就达到饱和吸附。这一结果与Hb相比，其达到 饱和吸附量的时间远远短于Hb分子。这可能是由于两种蛋白质的分子人小不同或它们在溶液 中的迁移速率不同所致【3l。 ’国家自然科学基金委(批准号20125515) 参考文献 【1】McQuillan，A．J．Adv．Mater2001，13，1034．