液体碱性蛋白酶制剂稳定化地研究.pdfVIP

液体碱性蛋白酶制剂稳定化的研究 张秀明高才昌 022 南开大学生命科学学院300071 mingxiuzhang@sina．com天津 液体酶制剂具有使用方便，生产成本低和没有粉尘污染等优点受到酶制剂工业 的重视，但液体酶保存稳定性差，因此液体酶稳定剂的研究和开发是液体酶生产的 一个重要方面。中国发酵工业协会技术委员会也把液体浓缩酶的稳定性改进和提高 作为酶制剂行业技术进步的重点攻关内容之一【11。本文对液体碱性蛋白酶稳定化和稳 定机理做了相关研究。 国外液体酶稳定剂大多采用高浓度丙三醇和丙二醇等，成本比较高。 朱孔生等 报导心3，用减压薄膜浓缩的2709碱性蛋白酶液加入廉价的氯化钠和乙醇有相当好的 贮存稳定性，但薄膜浓缩耗能大，成本高。超滤浓缩效率高，成本低，我们对超滤 浓缩酶液的稳定性及稳定剂进行了研究。 一．中空纤维超滤浓缩的碱性蛋白酶液体酶的稳定性 参照朱孔生等的配方，对中空纤维超滤浓缩的酶液加入氯化钠和乙醇，在不同 季节室温保存六批酶液，保存一个月后测定酶活力，六批保存一个月后平均剩余 活力55％，表明中空纤维超滤后，液体酶的贮存稳定性很差，结果见表1。 表1．中空纤维超滤浓缩碱性蛋白酶液体酶的贮存稳定性 批 号 1 2 3 4 5 6 平均 一个月后相对剩余酶活力％ 54 49 65 63 59 42 55 保存期的月份 4月 4月 7月 11月 1月 4月 二．中空纤维超滤浓缩的液体酶稳定剂筛选 对中空纤维超滤浓缩的液体碱性蛋白酶稳定剂进行了筛选。根据我们筛选的 上百种稳定剂配方及参考文献报导的配方，选择几种比较有效的配方做了碱性蛋 白酶液体酶的室温保存试验，结果列于表2。 表2．中空纤维超滤浓缩液体酶稳定剂的筛选 乘 余活力和相对剩余活力(％) 配方 保存条件 O月 1月 2月 3．5月 4月 23258124389605 7286 6-9月 1 100 53 4l 3l 23000181791766412438 7-9月 100 79 77 54 2 336962873525609 1-3月 100 85 76 36504 29203 29652 12-2月 3 lOO 81 80 4 100 85 82 37℃ 5 100 95 80 37℃ l07 在这几种配方中，配方2和配方3都有一定的稳定作用，但保存时间不长， 可能变性蛋白酶除结构不稳定外，还有蛋白酶对变性蛋白酶有自消化作用。配方4 和配方5，在37。C保存仍比较稳定，其中配方5，在37。C保存4个月，剩余酶活 力仍有80％，但成本高，缺乏实用价值。 三．膜式超滤浓缩碱性蛋白酶液体酶的稳定性 我们采用膜式超滤浓缩制备碱性蛋白酶液体酶，并进行了室温保存试验。稳 定剂采用表2中的配方1，体积为50升，结果见表3。 表3．超滤膜浓缩酶液的保存试验 保存