中国莱姆病蛋白免疫印迹法诊断标准地研究.pdfVIP

中国人兽共患病杂志 ChineseJournalofZoonoses 表株PD91的全基因组DNA中扩增出鞭毛蛋白及其中央区基因序列，经酶切处 理后，分别克隆到pETl IPTG诱导表达。表达产物用SDS—PAGE，Westernblot等方法分析。获得正 确的阳性克隆子后，测序分析，并与欧、美国等地区的伽氏疏螺旋体基因型和其 他基因型代表株的同等序列比较。大量表达重组鞭毛蛋白中央区，经纯化、定量 后用于Westernblot、ELISA检测莱姆病病人血清，评价重组鞭毛蛋白中央区 用于莱姆病实验室检测的效果。 结果表明，经测序显示该鞭毛蛋白的基因片段长度为101lbp，其中央区基 DNA碱基序列及氨基酸序列比较分析，同源性分别为94．7％、95．85％。重组鞭 毛蛋白及重组鞭毛蛋白中央区在宿主内均获得稳定、高效的表达，分子量分别约 为41Kda、20Kda。Westernblot分析显示重组鞭毛蛋白中央区具有同莱姆病螺 旋体鞭毛蛋白相同的抗原性，用于莱姆病实验室诊断能达到较高的敏感度和特异 度，证实重组鞭毛蛋白中央区是一种较好的莱姆病诊断抗原。 中国莱姆病蛋白免疫印迹法诊断标准的研究 蒋毅 万康林 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 (北京 102206) 莱姆病是一种经蜱传播由伯氏疏螺旋体，也称为莱姆病螺旋体感染机体而引 起的全身多系统受损的感染性疾病。莱姆病在全球五大洲的七十多个国家已有莱 姆病的病例报告，世界卫生组织已将该病列为需重点进行防治研究的新发现传染 病之一。研究出特异有效的实验室诊断方法和试剂，对有效防治莱姆病、保护人 民健康均有重要意义。 莱姆病临床症状表现多样，容易与其它疾病相混淆，因而实验室诊断结果极 为重要。莱姆病的实验室诊断方法主要包括：间接免疫荧光抗体法(IFA)、酶 和欧洲的研究者们分别制定了根据莱姆病螺旋体不同基因型的WB阳性诊断标 准。在我国，尚未见有关莱姆病WB检测的阳性诊断标准方面的报到。所以， 确定我国莱姆病WB检测的阳性诊断标准迫在眉睫。 因此，在国家“十五”攻关项目的资助下，我们开展了“中国莱姆病蛋白免 疫印迹法诊断标准的研究”。 本研究在完成中国莱姆病螺旋体基因分型、采用SDS—PAGE研究中国莱姆 病螺旋体蛋白质谱的基础上，选择中国莱姆病螺旋体主要基因型伽氏疏螺旋体代 表菌株PD…作为抗原出发菌，采用SDS、电转移和免疫印迹等技术，建 立了中国莱姆病诊断的蛋白免疫印迹方法及其标准操作程序，并应用于63l份 (包括莱姆病病例127份，对照组504例)血清标本的检测。检测结果分析是采 用Gel-Pro凝胶分析软件对代表菌株PD。一的蛋白抗原进行确定，再对病例组和 对照组血清样本WB检测结果进行统计分析。 中国人兽共患病杂志 of 57 ChineseJournaIZoonoses 组合的最佳选择。 本研究得出的我国莱姆病检测中WB阳性诊断标准为：对于IgG如果 P41中至少有一条蛋白条带显色则可诊断为阳性；IgM中如果是41KD显色，则 应该进一步作梅毒和钩体的鉴别诊断才可以确诊为莱姆病阳性。用此标准诊断 准确性为中等，而Youden指数在所有的组合中是最高的；同时考虑了IgM中 莱姆病和梅毒及钩端螺旋体之间较高的交叉反应。因此，应用该标准进行莱姆病 WB的诊断是可行的。 福建莱姆病研究的现状与问题 潘亮 潘敏楠 徐国英 福建省疾病预防控制中心 (福州 350001) 福建莱姆病研究始于1989年，1990年在原中国预防医科院流研所牵头组织 下，参与全 国性调查协作，从那时起，我们持续在福建开展莱姆病的调研，将现状与问题简 述如下。 一、调研现状 1990年在邵武、建阳、沙县等闽北林区发现并证实了首批患者，表明该病 并非仅局限 于我国东北林区。随后开展的一系列调研表明： 1．病原学：1990年一1992年问，从闽北邵武、建阳林区