预处理方法对纤维素酶制备和酶水解影响的研究.pdfVIP

第八届中国林业青年学术年会论文集 分9：林业生物质资源高效转化与技术 预处理方法对纤维素酶制备与酶水解影响的研究霉 杨静，张晓萍，勇强，余世袁+ (南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室，南京210037) 摘要里氏木霉RutC30以蒸汽爆破和稀酸低温预处理的玉米秸秆为碳源制备纤维素酶，滤纸酶活力分别为 米秸秆诱导的纤维素酶水解蒸汽爆破预处理玉米秸秆48h，在水解初期添加4IU／g纤维素的0一葡萄糖苷酶 4IO／g纤维素的13一葡糖苷酶水解蒸汽爆破和稀酸低温预处理的玉米秸秆，水解得率分别为68．27％和53％。 关键词里氏木霉纤维素酶B一葡萄糖苷酶纤维素水解 以木质纤维原料生产燃料乙醇是解决人类所面临的能源和环境问题，保持社会可持续发展的一条 有效途经之一。植物纤维原料制备乙醇工艺中，制约乙醇生产成本的主要原因之一是纤维素水解效率 低和水解糖液中可发酵性糖含量低‘卜21，主要是由纤维素酶活力低和酶系结构不合理造成。本文以降 低纤维素酶水解成本为目的，研究了纤维素酶的制备、纤维素酶对不同预处理的玉米秸秆的水解作用 及基于添加p一葡糖苷酶的纤维素辅助水解作用，可为有效利用木质纤维资源制取燃料乙醇提供依据。 蓬材料与方法 1．1原料玉米秸秆，采集于黑龙江省肇东市。商品纤维素酶，来源于里氏木霉，由sigma公司提供。 1．2原料预处理 ％(干基)。 料经充分洗涤后作为产酶碳源和酶解底物。玉米秸秆经蒸汽爆破预处理、洗涤后含纤维素含量42．00 ％(干基)，半纤维素含量4．46％。 1．3菌种 里氏木霉(Trichoderma 培养基上。 1．4纤维素酶的制备 纤维素酶制备培养基采用Mandels培养基【3】，碳源分别为稀酸低温和蒸汽爆破处理的玉米秸秆。 r／min的恒温振荡器上培养。产 50mL培养液置于250mL带棉塞的三角瓶中，接种量10％(v／v)，于170 酶第ld温度控制在(30+_1)℃，第2d后控制在(28+1)℃。 1．5酶水解 取绝干为59的预处理料置于250mL三角瓶中，加入一定量的水、柠檬酸缓冲液和纤维素酶液， 苷酶。充分搅拌均匀后用塑料纸扎紧瓶口，置于50+1℃、振幅80的恒温水浴中反应。分别于4、8、 应液中葡萄糖和纤维二糖的浓度变化，并计算酶解得纠4巧】。纤维素水解得率可用下式计算： Y=【(Cx0．05x0．9)／(GxW)】x100 式中：y一纤维素水解得率，％；O．05一水解糖液体积，L；C一水解液中葡萄糖和纤维二糖 作者简介杨静，女，南京林业人学在读博士生，主要从事生物质资源生物降解与转化的研究。电话 ·通讯作者：余世袁，教授，博士生导师，主要从事生物质资源生物降解与转化和制浆造纸生物技术的研究。 1335 第八届中国林业青年学术年会论文集 分9：林业生物质资源高效转化与技术 浓度，g／L；0．9一纤维素和葡萄糖、纤维二糖的转换系数；G一原料重，g；W一原料中纤维素含 量，％。 1．6分析方法 滤纸酶活力、CMC酶活力和D．葡糖苷酶活力采用国际理论和应用化学协会推荐的标准方法测定 Aminex 16)。采用HPLC法测定酶水解液中的糖组分。糖柱为Bio．Rad H2S04作为流动相，流速为0．6mL／min，柱温55℃。采用示差折光检测器检测，外标法测定。 鬃结果与讨论 2．1不同预处理玉米秸秆的纤维素酶合成 结果如表1。 表1 不同预处理玉米秸秆的纤维素酶合成 ∞∞ 错似 钰∞ ；一 ● 柏 ∞ 冀、井鼙饕■