乙酰胆碱敏感钾电流在心房肌和其相邻大静脉的分布研究.pdfVIP

The4thChina AtrialFibrillation Symposium 乙酰胆碱敏感钾电流在心房肌及其相邻大静脉的分布研究 赵庆彦黄从新梁锦军王腾谌辉 【摘要】 目的研究乙酰胆碱激活钾电流(IK，ACh)在犬肺静脉、上腔静脉、心耳和心房的分布情况，提供和探 讨迷走神经诱发心房内折返和房颤的离子通道基础。 方法30只犬通过迷走神经刺激，根据诱发房颤情况分为房颤组和对照组。迷走神经刺激后，取出心 脏，分离出左右心耳、左右心房、肺静脉和上腔静脉，用膜片钳全细胞法观察IK，AcIl在心耳、心房、肺静 脉和上腔静脉的分布。 结果 18只犬诱发出房颤，12只犬未诱发出房颤。房颤组：Il(AQl在左心耳、右心耳、左心房的分布明 and14．17±0．65VS and 10．34士0．62，8．24士0．4：57．65土0．42．pA／pFP0．05)； 对照组IKAcll在左心耳、右心耳，、左心房的分布也明显高于右心房、肺静脉和上腔静脉，但左右心 VS and14．78±0．6310．65±0．48， 耳和左心房的分布没有明显差异(IK．ACh16．27±0．87，16．75±0．82 8．35±0．41and 3．34±0．37．pA／pFP0．05)。结论IKACh在心房肌的分布是不均一的，这种不均一 可能是迷走神经刺激诱发折返和房颤的分子基础。心耳的分布明显高于其他部位，心耳可能在迷走神经 诱发房颤中有重要作用。而肺静脉和上腔静脉在迷走性房颤的作用较小。 【关键词】迷走神经；乙酰胆碱激活钾电流；心房颤动；犬 迷走神经对心房肌的影响是通过其末梢释放的递质乙酰胆碱(ACh)作用于胆碱能M2受体，与G蛋白 结合后激活Kch通道。促进K+外流使膜超极化，使3期复极加速和舒张期超极化。研究已经证实刺激迷走 神经可引发心房颤动(房颤)的发生，近来报道消融肺静脉的异位兴奋灶和迷走神经比单独消融异位兴 奋灶房颤的复发率明显降低【l】。为了进一步探讨艮Ch通道在心房的分布及其与异位兴奋灶的关系，我们通 过膜片钳技术来观察Kc|li恿道在心房及其相邻大静脉的分布情况。 材料与方法 1实验对象成年杂种犬30只，体重15～2lkg，戊巴比妥钠30mg起腹腔麻醉，气管插管，人工通气， 麻醉后左右侧颈部备皮。右侧股静脉以0．9％生理盐水维持静脉通路，采用体表Ⅱ、aVF、aVR导联监测心 电图。 2刺激迷走神经与分组贫离左右颈部迷走神经干，切断双侧迷走神经，用刺激电极插人迷走神经靠 本产)，以刺激频率20Hz和0．2ms的刺激波宽，10V的电压刺激迷走神经干远端，同时观察诱发房颤情况。 将诱发出房颤的犬作为房颤组，未诱发房颤的犬作为对照组。 饱和的0℃生理盐水中挤压排除腔内残血。小心分离，操作过程保持在上述液体中。在37C100％氧饱和恒温 73f论文集 o弃上清液后将组织块 无钙台氏液中将肺静脉组织剪碎成lmm3大小组织块，冲洗3次，每次5—6min 浓度为125 样观察，在单个心肌细胞的数量与质量达到最佳时，将含0．1％BSA的低钙台氏液稀释4倍后，去除大的组织 块获得单个心肌细胞悬液并逐渐复钙，于室温下保留备用。剩余组织块采用含同样浓度的新鲜酶液消化，同 法收集并保存细胞。左右心耳左右心房和上腔静脉的单个细胞分离同上12J。 4全细胞膜片钳记录按Hamill等方法进行全细胞膜片钳记录实验。吸数滴上述细胞悬液加入细胞池 边缘整齐、表面无颗粒、横纹清晰、无收缩的细胞，用负压使电极尖端与细胞膜之间形成1GO以上的高阻 抗封接，补偿快电容并吸破细胞膜形成全细胞记录模式，调节慢电容补偿和串联补偿以减少瞬时充放电电流 充电极内液的玻璃微电极导入细胞，产生的电流信号经EPC一9转换，存储于计算机硬盘中，供测量及分析用。