紫草白霉病病原生物学的研究.pdfVIP

研究论文 紫草白霉病病原生物学研究 孟娜周如军严雪瑞傅俊范 (沈阳农业大学植物保护学院，沈阳110161) 摘要：目前国内外尚未见紫草白霉病的相关报道。通过对辽宁省多个地区的调查，发 现此病害发生普遍。紫草白霉病在6月中旬开始出现，8—9月为发生盛期。本文对紫草白霉 病进行了症状描述，并进行了病原物分离、纯化及鉴定工作。对分离得到的菌株按照柯赫式 lithospermiPetr．茵侵染引 法则进行致病性测定，结果表明，该病是由紫草柱隔孢Ramularia 致。并对其病原茵生物学特性进行了初步研究，病茵在不同培养基上茵丝生长速度存在差异， 以紫草叶煎汁+PDA和PDA培养基为最适；病茵菌丝生长温度范围为5—30℃，最适为 250C；病菌茵丝致死温度为480C，10min；氮源对茵丝生长影响明显，蛋白胨为最适。 关键词：紫草白霉病；柱隔孢属；紫草柱隔孢；病茵生物学特性 ， Sieb．et Zucc．为紫草科多年生药用植物…，为传统中药 紫草Lithospermumerythrorhizon 材，以根入药，具有显著的抗生育、抗炎、抗肿瘤、杀菌抗病毒、保肝、免疫调节、凉 血、活血、解毒和透疹等作用心’3]。由于紫草市场需求量的增加，辽宁东部山区进行了人 工种植试验，随着人工栽培面积的日益增大，紫草白霉病在种植地块普遍发生，并呈加重 趋势，已严重影响了紫草种植业的健康发展。目前国内外对该病的研究报道还较少，本试 验对紫草病害进行病害调查，对病原菌进行了分离、纯化、鉴定，并对紫草白霉病病原菌 的生物学特性进行了初步研究。 1材料与方法 1．1 病害调查及病状观察 ’ 于2006年对沈阳农业大学药材种植园、抚顺县、清原县等辽宁省内主要紫草种植地 进行了系统观察，用五点取样法，调查统计发病情况。 1．2病原菌的分离、纯化及鉴定 对田间采回的病叶，用清水冲洗干净，采用常规组织块分离法分离M1。纯化采用单 孢分离法。根据病原菌的形态特征及其培养性状，参阅相关文献对病原菌进行鉴定。 1．3病原菌菌丝生长特性研究 1．3．1培养基 应用PDA平板培养基活化培养病菌，将直径为5ram的菌片接于孟加拉红、查彼 5种培养基平板上，置于250C下恒温培 (Czapek)、燕麦片、PDA、1％紫草叶片+PDA 养，每个处理重复3次，每间隔24h用游标卡尺测量各个处理的菌落直径，同时观察菌落 形态。 1．3．2温度 植物保护与现代农业 梯度。 1．3．3光照 采用PDA培养基，以连续黑暗、连续自然光照射和自然光与黑暗12h交替处理；每 处理重复3次。 1．3．4碳源 j 采用查彼(Czapek)培养基为基础，设置果糖、蔗糖、乳糖、葡萄糖、可溶性淀粉、 棉籽糖、半乳糖、乳糖、麦芽糖、树胶醛糖、木糖11种碳源，分别按209／L量加入。 1．3．5 氮源 采用Czapek培养基为基础，设置蛋白胨、甘氨酸、硝酸钾、硝酸钠、氯化铵、磷酸 二氢铵、草酸铵、硫酸铵、尿素9种氮源，分别按0．2％量加入。 1．3．6pH值 先配制PDA培养液，然后以其为溶剂，用盐酸一氢氧化钠溶液配制3．0、4．0、5．0、 6．0、7．0、8．0、9．0、10．0、11．0共9个不同pH值的PDA培养基。 1．3．7 菌丝致死温度测定 +5 在35—60℃范围内，以5℃为梯度确定大致致死温度范围，确定后以1oC为梯度确定 菌丝的致死温度。每个处理采用6个试管，每个试管内分别在无菌条件下放人10枚菌碟， 中，25℃培养3d，观察。