电化学酶传感器制作技术及应用_.docVIP

电化学酶传感器制作技术及应用 实验目的和要求 掌握 PH 7.4），水溶液（1 mM），对苯二酚（1 mM）,所配溶液均用二次蒸馏水。 实验仪器 上海辰华仪器公司CHI 760B电化学工作站，其中金电极为工作电极，铂电极为辅助电极，甘汞电极为参比电极 实验原理 电化学酶生物传感器工作示意图如下所示： 电化学酶生物传感器的基本结构单元由生物敏感分子 固定化酶膜 和信号转换器 基础电极 组成。在本实验中，过氧化氢氧化酶膜可以选择性识别被检测物质，发生酶促反应，产生化学信号，基础电极将化学信号转变为电信号，从而达到检测的目的。下面，我们具体阐述一下酶电极的构建和电化学工作站工作的原理： （1）电化学生物传感界面（酶电极）的构建 实验采用交联法制备酶电极，利用戊二醛双功能官能团试剂，使生物分子彼此共价结合成网状结构。首先，半胱胺巯基键与金电极形成金硫键，然后半胱胺上的醛基氨基与戊二醛的醛基缩合，最后，利用HRP上的氨基与戊二醛缩合，制备完整的电化学酶传感界面。制备好的酶电极示意图如下所示： （2）电化学测定 当我们构建的酶电极浸入到电解溶液中时，待测底物进入酶层的内部参与反应，大部分酶反应都会产生或消耗一种可被电极测定的物质，当反应达到稳态时，电活性物质的浓度可以通过电位或电流模式进行测定。 实验步骤 （1）电极处理：首先，将金电极分别用粒径为1.0mm、0.3mm、0.05mm的氧化铝粉末进行打磨处理，直到电极表面呈现镜面效果；其次，将打磨好的电极分别用水、无水乙醇、水超声，各自超声约3分钟，用以去除电极表面可能存在的杂质；最后，将超声好的电极泡PR洗液，扫硫酸备用。处理三个电极，分别标号为A、B、C。 （2）半胱胺的组装：将（1）步制备好的电极浸泡于半胱胺溶液中，在室温下静置过夜，备用。 （3）戊二醛的组装：将电极用PBS溶液冲洗干净,纯氮微气吹干，滴加5戊二醛，在 的恒温器中组装30 Min. （4）HRP的组装：将（3）电极用PBS溶液冲洗干净,纯氮微气吹干，其中标号为A、B的电极，继续滴加5辣根过氧化物酶，在的恒温器中继续组装30Min. （5）电化学测量： PBS溶液为电化学测量时的电解液。将A、B、C两根电极浸泡到PBS溶液中，在搅拌溶液的条件下施加一个-0.2V的电势，测量电流-时间曲线，30s后依次往PBS溶液中加入浓度为10、20、30、50、100过氧化氢溶液，继续测量电流-时间曲线，观察、记录实验过程中的情况。注：用来测定A、C电极电解液PBS溶液中，含有1 mM对苯二酚。 六、问题讨论 （1）酶电极有哪些组装方法并分别进行阐述 （2）戊二醛的在实验中的作用是什么? （3）对苯二酚在电化学测量时有什么作用？ 4 电化学分析方法有哪些？ 七、化学实验注意事项 （1）酶电极在的恒温器中组装时，需要一定湿度的环境以保持酶的活性，所以，通常情况下我们将酶电极置于器壁挂有小水珠的玻璃杯中，外覆保鲜膜保湿。 （2）电化学测量时，应尽量减小各种影响电化学工作站运行的因素，保证结果的可靠性和稳定性。