电压敏感染料di-4-ANEPPS的光谱研究.pdfVIP

第27卷!第7期 2oo Analysis 7年7月spectros∞pya11d渝ml Jul；：2007 电压敏感染料di一4一ANEPPS的光谱研究 徐正红1’2，张镇西¨，王 晶1，张 虹1一，李 政1，金妍姝·，丁海燕· 1．生物医学信息工程教育部重点实验室，西安交通大学生命科学与技术学院，陕西西安710049 2．西安交通大学电气工程学院，陕西西安710049 摘要实验研究了电压敏感染料n4-AN既 PS在家兔心肌组织中的吸收光谱和荧光光谱特性。结果表 明，含染料组织的光吸收普遍大于对照组，在450～550衄波段吸收谱差异更明显；染料在心室组织中的最 大吸收峰为 479．75士0．44 衄。通过测量含染料心脏不同部位的荧光光谱，首次发现心室组织、心房组织 和主动脉的最大荧光峰位有一定差异，其相对荧光强度则与染料的分布浓度有关。根据三维和二维荧光光 谱分别确定了含染料心房和心室组织的最佳荧光激发波长和荧光测定波长。利用心房和心室组织的静息电 位差，在不同波长激发光下测量了染料的荧光光谱移动，确定了光标测量实验的最佳激发光和相应荧光检 测波长范围。这些研究结果为心脏光学标测系统的设计提供了理论依据。 关键词电压敏感染料；吸收光谱，荧光光谱 光学标测；心脏 中图分类号：C 433文献标识码：A 文章编号：1000．0593 2007 07—1359∞4 光学标测 Opticaln璩ppiIlg 技术是借助于电压敏感染料染料对膜电位变化的响应速度可以分为慢反应电压敏感染料 、，0ltage_senSitivedy骼，VSDS 将细胞膜电位的变化转化成 和快反应电压敏感染料，其反应机理有所不同，目前快反应 光学信号进行记录的一种新的功能成像技术，是“细胞分子 ．电压敏感染料应用更广。由于心肌细胞动作电位除极速率极 电生理”研究中观测微观电兴奋传导唯一的不接触和不穿刺 快且心电传导速度较高 平均为o．5m·s-1 ，只能采用快反 的工具。其基本原理是：电压敏感染料灌注于待观测的细胞 应电压敏感染料。快反应染料主要是苯乙烯基染料，常用的 或组织，用激发光照射其表面，当细胞膜电位发生变化时 有ANEP arnjIl0衄phthyleht蜘yl谢diIli啪氨基萘基乙烯 △：％ ，膜表面染料的荧光光谱会发生移动，同步出现与膜 基吡啶 和RH 被rilla 电位变化呈线性关系的荧光光强变化 △F 。这样采用光学 滤波片滤除激发光后进行光电探测，记录膜表面荧光的变化 度快，光稳定性好且光毒性小。 量，从而将生物电信号转换为光学信号记录并成像。 本文实验研究了染料在家兔心肌组织中的吸收光谱和荧 光学记录膜电位的方法始于1968年，由coheIl等发现 光光谱特性，确定了用于心脏光学标测实验的最佳激发波长 动作电位变化时伴随荧光和光折射等光学变化，首次提出了 和相应的荧光检测波长范围，为构建光标测系统提供了基础 可以用光学信号来记录神经电兴奋中膜电位的变化[1]。 研究数据。 Sala腿等首次报道记录了心肌细胞膜电位[2]。在心脏电生理 研究中，光学标测不仅可以多位点、同步、无损地记录心肌 1材料与方法 细胞群的膜电位变化，测量细胞与细胞间的电传导，而且可 以记录全心脏的电活动，并转化为细胞动作电位及各种功能 1．1样品及其制备 图像[3一。自从20世纪90年代年以来它已成为从细胞水平 用两组家兔心脏，每组两只，一组进行兰根道尔夫氏法 研究心律失常、功能性折返、扭转性室速和纤颤等心脏电生 LaIlg朗dorfD灌注并加注染料，另一组只进行灌注但不加入 理现象的重要手段[5．6]。不仅如此，光学标测技术在骨骼肌染料作为实验对照。 细胞、神经系统和大脑功能等其他领域的研究中也都取得了 染料的配置：5nlg的皿4-ANl獬S加入4mL的二甲基 不少进展。 亚砜 功讧S0，di砌!也ylsufo】【ide ，在摄氏2～6℃温度下避 嵌入细胞膜的电压敏感染料分子也称为荧光探针。按照 光保存，使用前预热至室温。 收稿日期：2006-06-06。修订日期：2006—09_09 基金项目：国家自然科学基金项目 座机电话号码和座机电话号码 和医学光电科学与技术教育部重点实验室 JYG052 资助 edum 作者简介：徐正红，女，1969年生，西安交通大学生命科学与技术学院讲师 -通讯联系人z勉llaIlg@删liLxjnL 万方数据 1360 光谱学与光谱分析 第27卷 样本获取：2kg左右的家兔耳外侧静脉注射麻醉药戊巴 发射光谱如图2所示。从图中可以看出，主动脉的最大荧光 比妥钠 35mg．kg-1 及肝素 1ooo单位．kg-1 。麻醉后剪 开胸肋骨取出心脏，快速将主动脉连接到灌注套管，进行兰 右心室组织分