第3章生化过程中化学及生物参数检测技术.pptVIP

第3章 生化过程中化学及生物参数检测技术 本章内容 3.1 pH的测量 3.2 溶氧的测量 3.3 细胞浓度的在线测量 3.4 生物传感器及其应用 3.1 pH的测量 一 概述 在发酵过程中由于微生物的代谢(消耗碳源或氮源，释放代谢产物如酸等)会使得发酵液的酸碱度发生很大的变化，而发酵过程需要维持在一定的酸碱度范围内。 在生化过程中，pH的控制和调整已成为过程操作不可缺少的变量。因此pH的测量在生化过程控制中具有无比重要的地位。 pH：表示体系酸碱度的参数，为溶液中H+的活度，即 pH=-lg[H+]，其范围为0～14，pH7为酸性，pH=7为中性，pH7为碱性。 二 pH测量原理 pH一般是利用电化学原理进行测定。常用一组电极来测量，即测量电极和参考电极。测量回路如下图a所示，pH电极结构如下图b所示。 pH电极只对H+有响应 玻璃膜的结构由固定的带负电荷的硅酸晶格组成骨架(以GL-表示),晶格中存在体积较小,但活动能力较强的Na+, 起导电作用。 玻璃电极长时间浸泡在水溶液中,膜的表面形成一层厚度为10-4mm～10-5mm的水化层。 玻璃的硅酸结构与H+结合键的强度远远大于Na+的强度(约1014倍),发生如下离子交换反应：H+ + Na+GL- = Na+ + H+GL- 当玻璃膜与试液接触时,由于外部试液与玻璃膜的外水化层,以及内参比溶液与玻璃膜的内水化层中,H+的浓度不同,H+从高浓度向低浓度扩散。 破坏界面附近原来正负电荷分布的均匀性。在两相界面附近形成双电层结构,产生相界电位(E外和E内)。 玻璃电极的膜电位等于二者之差,即E膜=E外-E内；膜电位的产生不是由于电子的得失和转移,而是离子交换和扩散的结果。 在实际使用中常用的pH电极均为复合电极，即pH电极与参考电极以及温度传感元件复合在一起。 现在，许多制造商可提供能够耐受加热灭菌的pH电极。原位灭菌时，一般在灭菌时需将电极安装在一个由发酵罐制造商提高的专用外壳，以使电极外部在灭菌时能耐受0.1MPa的压力。 pH复合电极 二 pH传感器使用 1 使用 使用时，常先将pH传感器加上不锈钢保护套，再插入发酵罐，大多数pH传感器都具有温度补偿。 由于电极内容物会随使用时间和高温灭菌而不断变化，因而在每批发酵灭菌操作前后均需进行标定，即用标准的pH缓冲液校准。 通常pH测定范围为0～14，精度± 0.02～0.05，响应时间至少数十秒，灵敏度0.01。 pH的精确测量需考虑的条件： 温度 温度影响pH，只有同一温度下测量值才能比较。 溶液的均一性 在悬浮液中，通过搅拌来达到物理化、学性质均一。 工业pH测量 电极安装 基本原则为电极浸入待测液中，与液面高度无关； 安装在容易拆装且具代表性的地方； 有搅拌的反应器，注意安装位置与搅拌桨的距离等关系； 为了保证玻璃膜总是充满内部缓冲液，电极与水平的夹角不小于15o； 内有液体电解质的电极必须在正压下操作。 信号处理 信号具有高阻抗特性，长电缆易受干扰的影响。解决方法： 一般，电缆超过5 m，最好安装前置放大器，超过20 m时，必须安装前置放大器 也可采用同轴电缆连接电极，在有强电磁干扰的情况下则应使用同轴电缆，同轴电缆保护层应接地。 (1) 校准 发酵过程中重新校准十分困难，必须在使用之前校准。即将pH电极浸没到含一种或多种标准缓冲液中进行校准。pH电极需与发酵过程使用的pH计连接，按常规校准方法校准。 (2) 灭菌 灭菌有发酵罐原位灭菌、高压灭菌锅单独灭菌和使用化学灭菌。 (3) 校准的检查 灭菌会使pH传感器发生偏移，需再校准。现大型的发酵罐有该类无菌校准系统。也可无菌取出发酵液，在罐外测其pH，再与发酵罐上的pH传感器测量值进行比较进行校准。 2 维护 (1) 电极功能维护 清除污染物，防止老化(高温等)。避免污染的方法有： 经常使用适当的溶剂冲洗电极； 如果有固体物质沉淀膜表面，则可提高搅拌转速或增大通气速率来除去。 如含有蛋白质的污染物，电极浸入胃蛋白酶溶液或HCl溶液几小时；脂类等，用丙酮或乙醇冲洗。 (2) 电极储存 电极应贮存在参考电解液中，如干燥贮存需在参考电解液活化数小时才可使用。 三 温度补偿 温度主要通过一下四个方面影响pH测量值： 温度影响待测溶液的离子积 温度影响电极斜率(见能斯特方程)； 温度影响等温内插点位置； 温度影响电极扩散相应时间。 在实际测定时特别要注意，只有当电极标定与待测溶液温度相同时才能得到准确的pH测量值。 3.2 溶氧的测量 一 溶氧测定原理 溶氧(DO) 影响细胞的生长、产物的生成。反应器中溶氧的检测远比温度等参数检测困难。 溶氧检测主要有3种方法，均需利用膜将测定点与发酵液分离，使用前均需进行校准。 导管法； 质谱电极法； 电化