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腺病毒介导的 p53 基因对人肝癌细胞抑制作用的实验研究_医学论文 腺病毒介导的 p53 基因对人肝癌细胞抑制作用的实验研究_医学论文 作者：田耕 刘积良 董洪松 陈伟红 谭淑瑜 【摘要】 目的：研究重组腺病毒介导的野生型 p53 基因对人肝癌细胞系 HepG2 的抑制作用。方法：用 MTT 比色法检测重组人 p53 腺病毒（Ad-p53）在不同感染滴度、不同感染时间对人肝癌细胞 HepG2 生长的抑制作用，用流式细胞仪检测 Ad-p53 作用后 HepG2 细胞的凋亡率；采用瘤内注射的方法观察 Ad-p53 对裸鼠移植瘤的抑制作用。结果：Ad-p53 对HepG2 细胞有明显的抑制效应，效靶比（MOI）越高、作用时间越长，抑制作用越强；当 rAd-p53 在 125 MOI 效靶比时，细胞生长基本达到完全抑制；p53 转导显著增加了 HepG2 细胞的凋亡率；瘤内注射 Ad-p53 后，荷瘤裸鼠的肿瘤生长受到明显抑制。结论：Ad-p53 对人肝癌 HepG2 细胞有明显的抑制效应，其抑制效应具有时间、剂量依赖关系，Ad-p53 转导野生型 p53 基因可能是一种有效的肝癌基因治疗途径。 【关键词】 肝癌；腺病毒； p53；基因治疗 〔Abstract〕 Objective To explore the potential use of adenovirus mediated p53 gene (Ad-p53) therapy for hepatocellular carcinoma. Methods A human hepatocellular carcinoma cell line HepG2 was used. Recombinant adenovirus carrying wild-type p53 gene was transfected into HepG2 cells in vitro and injected into tumor nodules in vivo. The growth of HepG2 cells in vitro and established hepatocellular carcinoma nodules in nude mice was examined. Cell apoptosis was analysed by Annexin-V/PI labeling flow cytometry method. Results Cell growth was greatly suppressed at ≥ 125MOI. p53 transfection can increase HepG2 cells apoposis rate. In vivo studies, intratumoral injection of Ad-p53 significantly inhibited hepatocellular carcinoma implanted xenograft. Conclusion Transfection of wild-type p53 gene via Ad-p53 is a potential approach to the therapy of hepatocellular carcinoma. 〔Key Words〕 Kepatocellular carcinoma Adenovirus p53 Gene therapy 原发肝细胞性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，因其恶性程度高、预后差，目前临床采用的多种传统治疗手段都不能收到满意的效果。p53 基因在肝癌细胞中的突变率达 50% 以上[1]，是肝癌细胞中突变频率最高的基因，因此成为肝癌基因治疗的最佳靶点之一。腺病毒 DNA 不整合到宿主细胞基因组中，对人体无遗传毒性，作为基因载体既可感染处于分裂状态的细胞，也可感染静息期细胞。本研究旨在探讨重组人 p53 腺病毒（Ad-p53）对人肝癌 HepG2 细胞的抑制作用，现报道如下。 1 材料与方法 1.1 材料 重组腺病毒介导 p53 基因（Ad-p53）由深圳市赛百诺基因技术有限公司提供，对照病毒 Ad-LacZ 由中山大学医学院伍庄博士惠赠。人肝癌细胞株 HepG2（内源性表达野生型 p53）由中山大学医学院伍庄博士惠赠，细胞在 RPMI-1640 培养基传代培养。5~7 周龄 BALB/c 裸鼠，雌性，体重 18~21 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，饲养于无菌塑料透明隔离器内，动物实验时严格无菌操作。 1.2 MTT 法检测病毒感染滴度与细胞存活的关系 将 HepG2 细胞按每孔 500 个细胞分别接种于 96 孔板内，第 2 天用 Ad-p