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植物启动子的研究进展 梁希生物技术101班 丁东栋 201001220520 引言：在基因工程的研究中，启动子能够调控基因的表达，它包括了组成型启动子、组织特异性启动子和诱导型启动子[4]。目前最常用的启动子是组成型启动子，组成型启动子具有强启动功能，但它可能影响植物的正常生长，如基因的组成型表达会给植物带来很大的负担，打破植物本身代谢的平衡，严重时会造成植物死亡等，所以对于植物组织特异性启动子和诱导型启动子的研究是定向改良农作物品质性状方面具有重要的理论和实际意义。本篇文献综述包括了近些年组织特异性启动子的克隆及其表达，以及诱导型启动子的研究及其研究方法，还有在水稻、拟南芥植物中启动子的功能分析等等。本文交待了关于植物启动子研究的一些历史和成就、现状，对启动子研究已解决的问题和尚存在的问题，并且稍稍阐述了植物启动子研究对当前的影响和发展趋势。也概括地指出了自己对课程的研究意见等等。 关键词：组织特异启动子、诱导型启动子、载体构建、植物表达载体 到目前为止，专家学者们对于植物启动子的研究方法都是基本相同的，都参照了DNA重组技术的步骤。首先，将植物表达载体中的组成型启动子利用核酸内切酶或外切酶双酶切切除组成型启动子，并形成酶切位点，一般组成型启动子为CaMV35S。第二步，将作为研究对象的启动子酶接到质粒基因组中，形成重组载体。第三步，是验证启动子片段是否已经连接到表达载体上，这一步骤可以通过酶切和PCR技术来进行。第四步，是将重组的载体转化到宿主细胞中，即细菌当中，再用细菌去侵染植物组织以完成将目的基因转入到植物细胞中的目的。然后是进行植物组织的无菌培养，有些还设置对照组来比较不同启动子的表达对植物生长的影响[5-7]。 植物启动子的研究已经有了较大的成就，随着分子生物学技术的不断发展与完善，多种可以在不同组织器官中表达的特异性启动子已经被分离，从而使外源基因在植物体内可以定点、定量、定时进行表达。最大限度地减少对植物其他代谢途径的影响。从文献中，有提到将拟南芥中的根特异启动子pyk10在烟草中表达[1]，以明确拟南芥根特异表达基因pyk10启动子在烟草的根部特异表达。实验结果表明，克隆的根特异表达基因启动子与已报道的pyk10启动子的一致性为100%，表明该启动子为根部特异表达启动子，为揭示植物根的发生、分化和发育机制，以及培养抗根部病虫害和营养高效利用型转基因烟草奠定了基础。 对于双向启动子[2-3]、[11]也开始有所研究。近年来的生物信息学研究表明，在人类、果蝇、拟南芥、水稻、杨树等动植物基因组中存在大量的相邻且转录方向相反的基因，称之为双向转录基因对，也被称为“头对头”基因对。双向启动子序列分为启动子序列重叠的双向启动子和启动子序列不重叠的双向启动子。并且研究表明，在拟南芥、水稻和杨树等植物基因组中，小于1Kb的双向启动子的数量与基因组的大小成负相关，即基因组越大，小于1Kb的双向启动子数量越少。大多数双向启动子在结构上具有缺少TATA盒和具有较高的GC含量的结构特点。关于双向转录基因的共表达机制，研究者提出多种模型中直接的相互作用和共享染色体结构被人们普遍接受。当双向启动子序列较短时，则大部分的共表达信号由共享启动子决定，即在比较近的距离时，直接的转录水平上的相互作用变得相当重要；当双向启动子序列长度超过400bp时，共表达水平与启动子长度无关。并且利用双向启动子进行转基因时，可以在其两端融合某生理或生化过程的两个基因或多个基因及其组合，这不仅避免了不同基因引入时的繁琐步骤，减少了引入受体生物中启动子数目，更不必担心引入生物体内的启动子之间序列同源而导致的转基因沉默现象的发生。双向启动子的应用为解决转基因技术难题提供了可能，在基因工程研究和应用领域具有不可估量的作用，正成为转基因技术研究的新领域。 对于启动子的功能分析也已经比较全面。一般研究者对启动子的功能分析方法有生物信息学分析法和实验分析法[8]。从文献上来看，对于水稻以及拟南芥这样的典型的模式植物的启动子的功能分析的研究比较多[9-10]，在文献中有讲到，研究者将第2类金属硫蛋白基因启动子克隆到籼稻中，并且在转基因拟南芥中和水稻发芽的胚胎中对其功能进行分析，结果表明了，全面启动子驱动GUS主要地在拟南芥导管组织中的表达，并且在发展过程中经历一个单向的模式，再经历一个高峰时期在叶子和花器官的成熟组织中。在进行启动子缺失分析来了解不同的区域的启动子对植物生长发育中的器官想成或者发育的影响[9]。目前，关于非生物胁迫诱导启动子顺式作用元件及转录因子的研究也越来越成为热点。植物非生物胁迫启动子顺式作用元件及转录因子的研究方法主要有点突变分析法、凝胶组织分析法、DNA足迹分析法、酵母单杂交法、生物信息学分析与预测等。鉴定出更多的顺式作用元件及转录因子第为抗逆基因表达