第二节 饲料真蛋白质.docVIP

第二节 饲料真蛋白质（TP）的测定方法 适用范围 本方法适用于饲料中真蛋白质的测定。 二、原理 蛋白质在一定碱性条件下，能与重金属盐类发生盐析作用而析出沉淀，此沉淀物不溶于热水，而非蛋白氮则易溶于水。用热水洗沉淀，将水溶性含氮物洗去，剩下的沉淀物再用定氮法测定，得出真蛋白质的含量，再用真蛋白质与粗蛋白质含量之比，可判断出饲料中是否掺入水溶性非蛋白含氮物质。 三、仪器与设备 实验室用样品粉碎机。 分样筛：直径0.45mm（40目）。 分析天平：感量0.0001g。 烧杯：200ml。 玻璃棒。 玻璃漏斗：直径10cm。 定性滤纸：中速，直径15cm。 表面皿：直径10 cm。 干燥箱：可控温度65～70℃。 消化管。 消煮炉。 半微量凯氏定氮仪或KDN-2C型定氮仪 容量瓶：100ml（半微量凯氏定氮仪用）。 锥形瓶：150ml（半微量凯氏定氮仪用）。 锥形瓶：250ml（KDN-2C型定氮仪用）。 酸式滴定管。 四、试剂与溶液 本方法除特殊注明外，试剂均为分析纯，水均为蒸馏水。 硫酸。 硫酸铜溶液：60g/L。建议每次配制200～500ml置试剂瓶中备用。 混合催化剂：硫酸铜（5个结晶水）：硫酸钾＝1：15粉碎过40目混匀。（同粗蛋白质的测定） 氢氧化钠：12.5g/L。建议每次配制200～00ml置塑料瓶中备用。 硼酸：20g/L。 6、混合指示剂：甲基红0.025 g/25mL乙醇溶液；溴甲酚绿0.125 g/25mL乙醇溶液。两溶液等体积混合，在阴凉处保存期一个月。（同粗蛋白质的测定） 7、硼酸吸收液：按1000ml浓度为20g/L的硼酸溶液，加入6ml的混合指示剂的比例混合，现用现配。 8、盐酸标准溶液： （1）半微量凯氏定氮仪用：0.05mol/L盐酸标准溶液：取4.2ml浓盐酸，用蒸馏水定容至1000 ml。标定后备用。 （2）KDN-2C型定氮仪用：0.07mol/L盐酸标准溶液：取6.0ml浓盐酸，用蒸馏水定容至1000 ml。标定后备用。（同粗蛋白质的测定） 氯化钡试液：50g/L。建议每次配制50ml置滴瓶中备用。 五、试样的选取和制备 取具有代表性试样，用四分法缩减至50g，粉碎至40目。 六、测定步骤 （一）样品的前处理： 精确称取样品0.5g（KDN-2C型定氮仪称取0.2g左右），置于200ml烧杯中，加50ml水，盖上表面皿，在电炉上加热煮沸，取下，加入12.5ml 60g/L硫酸铜溶液，再在搅拌下缓缓加入12.5ml 12.5g/L 氢氧化钠溶液，摇匀，电炉上小火煮至沸腾后，取下，室温放置2小时。用滤纸在波纹漏斗上过滤，并用少量温水多次冲洗烧杯和沉淀物，直至洗出液无SO42-（检验方法：用表面皿接取滤液5滴，加一滴氯化钡溶液，无白色沉淀），连漏斗一起放入65～0℃烘箱烘约40分钟至干燥，冷却。 同时做空白实验（与以上样品处理方法同）。 （二）样品的处理： 凯氏半微量定氮法： 1、试样的消煮：小心卷起滤纸呈棒状，连沉淀物一起移入预先加入6.4 g混合催化剂的消煮管中，再加入15ml硫酸，将消煮管放入消煮炉中加热，温度控制在420℃，（注意观察，若消煮液上喷，应停止加热，至消煮液回落再继续加热），当溶液呈透明的蓝绿色时，再继续加热2.5小时。 2、转移定容： 消煮完全后，将消煮管取出待消煮液完全呈淡蓝色时，先用蒸馏水少量多次冲洗弯颈漏斗及消煮管口，用腕力摇动消煮管，然后倒入100ml容量瓶内，用少量蒸馏水多次冲洗消煮管及用于转移的漏斗内外壁，待冷却后，定容至刻度，作为试样分解液。 3、氨的蒸馏：半微量蒸馏法 将蒸汽发生器内加入2/3位置蒸馏水及玻璃珠或炉渣、4ml左右浓硫酸和几滴0.1%甲基红指示剂，使呈红色，提供酸性环境。向反应室内注入适量蒸馏水，封闭反应室进液处和废液室出液处铁夹，待蒸馏瓶内液体将要沸腾时，打开冷凝管端接的自来水龙头，当冷凝管末端流出水开始蒸馏。先用待测液润洗移液管，再准确移取试样分解液5ml注入反应室中，用20 ml硼酸吸收液在冷凝管末端吸收（液面下吸收），再加10 ml氢氧化钠入反应室，用少量水冲洗进样入口，并用水封注进液口，防止漏气。开始蒸馏至接收液约为75ml，将冷凝管末端离开液面，继续蒸馏至100ml时，用少量蒸馏水冲洗冷凝管末断，然后停止蒸馏。 4、滴定： 取下蒸馏后的吸收液立即用0.05mol/L盐酸标准溶液滴定由蓝绿色变为灰红色终点。颜色应与空白一致。 5、结果计算： 1）、计算： 式中V2 ——滴定试样时所需盐酸标准溶液体积（ml）； V1 ——滴定空白时所需盐酸标准溶液体积（ml）； C——盐酸标准溶液浓度（mol/L）； M——试样质量（g）； V——试样分解液体积（ml）； V`——试样分解液蒸馏用体积（ml）