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薄层色谱分析技术综述 马婷 浙江大学药学院 310031 摘 要 薄层色谱法，是指将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。 待点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药物的鉴别、杂志 检查或含量测定的方法[1]。本文介绍了薄层层析法的原理，操作方法，应用优点及其在药物 杂质分析、质量控制等方面的应用实例，并指出了此方法的局限性、须待解决的问题。 关键词 原理；操作方法；优点；应用实例；局限性 薄层层析法也称薄层色谱法(thin—layer chromatography)，是快速分离和定性分析少 量物料的一种非常重要的技术，常用TLC表示。TLC是色谱技术的一种，与经典的分离提纯手 段(重结晶、升华、萃取和蒸馏等)相比，薄层色谱法具有微量、快速、分离效率高和灵敏度 高等优点。自从五十年代发现以来，薄层层析法在很多方面得到了广泛的应用，如判断有机 合成反应进行的程度；合成药物的质量控制及杂质检查；中草药的分离提纯；药物分析及含 量测定等。本文介绍了薄层色谱法的原理，并列举出一些实例主要讨论其在中药测定、化合 物鉴定等方面的应用。 1 TLC 原理 通常所说的薄层色谱一般是指吸附薄层色谱，可根据TLC所采用的涂层材料性质的不同， [2] 其物理化学原理也有所不同，可分为 ： (1)吸附薄层色谱。采用硅胶、氧化铝等吸附剂铺成薄层，利用吸附剂表面对不同组分 吸附能力的差别达到分离的方法。 (2)分配薄层色谱。由硅胶、纤维素铺成薄层，不同组分在指定的两相中有不同的分配 系数。 (3)离子交换薄层色谱。由含有交换活性基团的纤维素辅成薄层。 (4)排阻薄层色谱。利用样品中分子大小不同，受阻情况不同加以分离，也称疑胶薄层。 此外，还有利用氢键能力的强弱而分离的聚酰胺薄层色谱等。 吸附薄层色谱是使用最为广泛的方法，其原理概括起来是：由于混合物中的各个组分对 吸附剂(固定相)的吸附能力不同，当展开剂(流动相)流经吸附剂时，发生无数次吸附和解吸 过程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前移动，吸附力强的组分滞留在后，由于各组分具有 不同的移动速度，最终得以在固定相薄层上分离。一个化合物在薄层板上上升的高度与展开 剂上升的高度的比值称为该化合物的Rf值： 化合物移动的距离 展开剂前沿移动的距离 Rf的意思是“ration to front”(即与前沿之比)。当测量条件全部规定好后(包括：所 用的展开剂体系，吸附剂，吸附剂的厚度，点在板上的试样的相对数量等)，任何一种稳定 化合物的Rf值是个常数，而且它相当于该化合物的一个物理性质。一般天然产物，组分复杂， 在使用柱分离中展开剂选择的好坏，直接决定了柱分离所得单体的多少，因此如何找到合适 的展开剂就是一项非常重要的工作。有关展开剂优化新方法已见报道的有：系统分析法、溶 剂系统极性强度法、数值分类信息量选取法、系统差值一信息量分类法、类平均一信息量分 类法、逐步组合法、择优组合法、窗图法、数值分析法、图示法、重叠分辨率图法、理想分 [3] 离法、混合设计统计技术、改进单纯形二因子优化法、棱柱形法、均匀设计法等 。 2 操作方法 将5g硅胶G有搅拌下慢慢加入到1O-12ml1%的羧甲基纤维素钠(CMC)水溶液中，调成糊状。 然后将糊状浆液倒在洁净的载玻片上，用手轻轻振动，使涂层均匀平整，大约可铺8×3cm 载 玻片6－8块。室温下晾干，然后在l1O℃烘箱内活化0.5h。 用低沸点溶剂(如乙醚、丙酮或氯仿等)将样品配成1%左右的溶液，然后用内径小于lmm 的毛细管点样。点样前，先用铅笔在层析上距末端lcm处轻轻画一横线，然后用毛细管吸取 样液在横线上轻轻点样，如果要重新点样，一定要等前一次点样残余的溶剂挥发后再点样， 以免点样斑点过大。一般斑点直径大于2mm。如果在同一块薄层板上点两个样，两斑点间距 离应保持1-1.5cm为宜。干燥后就可以进行层析展开。 以广口瓶作展开器，进入展开剂，其量以液面高度0.5cm为宜。在展开剂中靠瓶壁放人 一张滤纸，使器皿内易于达到气液平