人前脑啡肽基因修饰人胚胎肾细胞的构建.pdfVIP

尘垡竖鲤。兰壁!釜!!!!堡!』】塑!!鲞塑!塑!坚!』△!型!!堂!：』!堡!!!!!!!!：丝!!!：j 673 ·疼痛诊疗与研究· 人前脑啡肽基因修饰人胚胎肾细胞的构建 白凤杨保仲 薛朝霞 潘喻飞 黄平 重组 【摘要】 目的构建人前脑啡肽基因(hPPE)修饰的人胚胎肾细胞(HEK293细胞)。方法 J进行双酶切获得hPPE基因，运用基因重组 质粒pcDNA3．1(+)／hPPE经限制性内切酶HindIIl和Not 技术将hPPE基因与表达载体同源莺组，转染293T细胞进行慢病毒包装、扩增、纯化。测定病毒滴度， 再将莺组的慢病毒载体转染HEK293细胞。用Westernblot法检测hPPE基因在HEK293细胞中的表 达。结果 重组慢病毒载体阳性克隆测序结果和基因库的hPPE基因序列完全一致。含有hPPE基因 xliP 的慢病毒载体，滴度为2．07 TU／ml。转染慢病毒载体后的HEK293细胞．在荧光显微镜下未见到 GFP荧光。转染Uhe．GFP-L．V．李病毒载体的HEK293细胞，可见到较强的荧光。Westernblot法榆测到 经慢病毒载体转染后的HEK293细胞中hPPE基因表达呈阳性。结论成功构建了hPPE基因修饰的 HEK293细胞，使hPPE基因可在HEK293细胞巾稳定表达。 【关键词】脑啡肽类； 细胞系；生物，基肉修饰；基因疗法 Constructionofhuman cells huraan BAI embryonic exhibiting gene kidney preproenkeph柚inexpression Bao—zhong．XUEZhao·xia，PAN Clinical n蜡，YANG yu毋i，HUANGn凡g．DepoamerUo，Anesthesidogy．First Medical Medical 030001．China College矿ShanxiUmwrs蚵。Taiyuan Correspondingauthor：YANGBswzJlong．Emall．yangbz2000@yalwo．corn．m Toconstructhuman withhuman 【Abstract】Objective embryoniccells(HEK293)modifiedpre— kidney hPPE wereobtainedfromrecombinant pmenkephalin(hPPE)gene．Methodsgenefragments plasmidpcDNA3．1 Ill (+)／hPPE restrictionendonueleaseHind andNot recombinationoflentivirusand byusing I．Homologous hPPE WaS recombinantDNA eelhwerethentransfectedwiththe gene produeeclbyusing technology．HEK293 recombinantlentivimsvector8．The ofh