青岛地区结核分支杆菌吡嗪酰胺耐药基因pncA的检测_药学论文.docVIP

青岛地区结核分支杆菌吡嗪酰胺耐药基因pncA的检测_药学论文 青岛地区结核分支杆菌吡嗪酰胺耐药基因pncA的检测_药学论文 【摘要】 目的 了解青岛地区结核分支杆菌耐吡嗪酰胺（PZA）分离株pncA基因突变的情况，探讨其与耐PZA之间的关系。方法 应用BACTEC培养系统对76例结核分支杆菌临床分离株进行结核分支杆菌常规培养和药敏检测，聚合酶链反应单链构象多态性（PCR）技术检测pncA基因的突变。结果 76株结核分支杆菌临床分离株均经PCR扩增出结核分支杆菌复合群保守序列IS6110基因片段，69株扩增出pncA基因的特异序列。后者包括：SSCP泳动异常者18株，其中耐药株13株，敏感株5株；SSCP泳动正常者51株，其中耐药株14株，敏感株37株。结论 青岛地区结核分支杆菌临床分离株耐PZA主要分子机制之一为pncA基因的突变；PCR技术能快速准确地检测结核分支杆菌耐PZA基因pncA的突变，可弥补常规药敏试验的不足。 【关键词】 分支杆菌 结核 基因 pncA BACTEC培养方法 聚合酶链反应 单链构象多态性 ［ABSTRACT］ObjectiveTo investigate the mutations of pncA gene in clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis and the relationship between pncA gene and pyrazinamide (PZA)resistance in Qingdao area. MethodsFrom 76 clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis, the routine culture and drug susceptibility detection were done by BACTEC460 system, and the mutations of pncA gene detected by PCRSSCP.ResultsAmong the 76 isolates, 44 strains were PZAsensitive and 32 PZAresistant by　the BACTECe, in which, 13 were PZAeresistant and five PZAsensitive. Fiftyone strains displayed normal pncA SSCP profile, in which 14 were PZAresistant and 37 PZAsensitive. ConclusionMutation of pncA gene might be one of the major molecular mechanisms in pyrazinamideresistance of clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis. PCRSSCP appears to be a promising method for rapid detection of pyrazinamideresistant Mycobacterium tuberculosis, preferable to the routine drugsusceptibility test. ［KEY WORDS］Mycobacterium tuberculosis; genes, pncA; BACTEC; polymerase chain reaction; single 近年来,结核病疫情呈现全球性明显回升趋势，其主要原因之一是耐药菌株的产生和播散，尤其是耐多药菌株的涌现。目前对结核分支杆菌耐药分子机制的研究主要集中在各种药物的作用靶位及其相关基因的突变位点上。吡嗪酰胺（PZA）自1949年首次用于肺结核治疗以来，作为第一线抗结核药物应用已有50多年的历史。近几年结核分支杆菌临床分离株对其耐药趋势日渐上升，并且呈现与异烟肼和利福平同时耐药的现象［1］。然而，目前对PZA的作用机制及耐药分子机制尚不清楚。本文应用BACTEC培养系统进行结核分支杆菌常规培养和药敏检测，聚合酶链反应单链构象多态性技术（PCR）检测结核分支杆菌pncA基因，旨在了解青岛地区结核分支杆菌耐PZA分离株的pncA基因突变情况，探讨其与耐PZA之间的关系,以建立新的、快速有效的结核分支杆菌药敏试验方法，弥补常规药敏试验的不足。 1 材料和方法 1.1 标本来源 76例结核分支杆菌临床分离株来自青岛市结核肺病防治研究所2002年1～12月诊治的肺结核病人。其中初