重组PP150抗原用于胶体金免疫斑点技术检测抗HCMV_药学论文.docVIP

重组PP150抗原用于胶体金免疫斑点技术检测抗HCMV_药学论文 重组PP150抗原用于胶体金免疫斑点技术检测抗HCMV_药学论文 作者：王清,王锡波,徐龙强,于维林,于红,张文卿 【关键词】 巨细胞病毒 Recombinant PP150 of human cytomegalovirus as antigene for colloidal gold immunodot assay to detect HCMVIgM in sera 　　【Abstract】 AIM: To use recombinant pp150 of human cytomegalovirus (HCMV) in colloidal gold immunodot assay (CGIDA) for the detection of HCMVIgM in sera. METHODS: A fragment of gene coding for pp150 antigen epitopes (840-1048aa) was expressed in E. coli and the fusion protein was purified. The results were compared with those of specific antibodies ELISA IgM. RESULTS: Recombinant antigen CGIDA had a good agreement (96.0%) with ELISA kit. The specificity of CGIDA was 100% and the sensitivity was 74.2%. CONCLUSION: Recombinant pp150 is an effective and valuable antigen used in CGIDA for detecting HCMVIgM. 　　【Keywords】 cytomegalovirouses,human;gene pp150;prokaryotic expression; gold colloidal; immunodot assay 　　【摘要】 目的: 探索应用重组人巨细胞病毒(HCMV)PP150抗原用于免疫滴金技术检测血清中抗HCMVIgM的诊断价值. 方法: PCR扩增HCMV pp150抗原决定簇（840～1048aa）编码基因片段，插入原核表探索应用重组人巨细胞病毒(HCMV)PP150抗原用于胶体金免疫斑点技术（CGIDA）检测血清中抗HCMVIgM的诊断价值. 达载体pMAlp2，转化宿主菌E.coli，诱导表达及纯化. 重组抗原CGIDA与酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒对比检测. 结果： 重组抗原CGIDA与ELISA试剂盒比较,符合率达96.0%；CGIDA检测HCMVIgM的敏感度为74.2%，特异性为100%. 结论: 重组抗原pp150用于 CGIDA对HCMV的早期诊断，具有较好应用价值. 　　【关键词】 巨细胞病毒, 人；基因pp150;原核表达；胶体金;免疫斑点法 　　0引言 　　胶体金免疫斑点法(colloidal gold immunodot assay,CGIDA)快速简便，吕贯廷等［1］成功地建立了CGIDA检测HCMVIgG的方法，但国内关于抗人巨细胞病毒(HCMV)IgM的临床检测的报道较少. 我们用基因工程方法合成HCMV pp150（841~1084aa）抗原,以胶体金为标记手段,建立了检测血清抗pp150 IgM抗体的胶体金免疫斑点法. 　　1材料和方法 　　1.1材料 　　HCMV AD169毒种、宿主菌E.coli DH5α, 原核表达质粒pMAlp2为山东省分子病毒学重点实验室提供. EcoR I, HindⅢ, T4 DNA Ligase, Wizard PCR Preps DNA Purification System, Wizard Plus Minipreps DNA Prurification Systems, IPTG, 硝酸纤维素膜（孔径0.65 μm）等均购自Promega公司. 麦芽糖结合蛋白(MBP)纯化树脂购自BioRad公司. 抗人IgM及HCMVIgM ELISA试剂盒由山东省分子病毒学重点实验室提供. HCMV IgM阳性血清120份经青岛大学医学院附属医院妇产科研究室提供（晶美生物工程有限公司人巨细胞病毒IgM ELISA试剂盒检测）; 266份临床血清采自青岛大学医学院附属医院正常孕妇. 正向引物： 5′TGGCG↓AATTCACCTCTTCCGCTTCTTCGGC3′，反向引物：5′GTGTTA↓AGCTTCTATTCCTC