超临界二氧化碳萃取工艺对蛇床子素提取率的影响研究_药学论文.docVIP

超临界二氧化碳萃取工艺对蛇床子素提取率的影响研究_药学论文 超临界二氧化碳萃取工艺对蛇床子素提取率的影响研究_药学论文 作者：宫竹云， 张高勇， 聂永亮， 谷惠先 【关键词】 超临界二氧化碳萃取；,,蛇床子素；,,提取率；,,二次回归连贯设计 　　摘要：目的对五因素间的交互作用进行考察，确定超临界CO2萃取的最佳工艺参数。方法采用二次回归连贯设计的方法。结果P萃与T分Ⅰ之间的交互作用较为明显，T分Ⅰ与T分Ⅱ之间的交互作用次之，T萃与T分Ⅰ、T萃与P分Ⅰ，P分Ⅰ与T分Ⅱ之间的交互作用对蛇床子素提取率有一定影响。优化的工艺条件为：萃取压力为40 MPa，萃取温度40℃；分离Ⅰ温度45℃；分离Ⅱ压力为5 MPa，分离Ⅱ温度为46℃；CO2流量为18 L/h，萃取时间为80 min，在此条件下，蛇床子素提取率可达4.32%。结论采用二次回归连贯设计可以客观地反应各因素对目标函数的影响规律。 　　关键词：超临界二氧化碳萃取； 蛇床子素； 提取率； 二次回归连贯设计 　　蛇床子系伞形科蛇床属植物蛇床Cnidium monnieri(L.) Cuss.的干燥成熟果实。中药蛇床子的化学成分比较复杂，除挥发油外，主要为蛇床子总香豆素（Total coumarins of Fructus Cnidii ,TCFC）。TCFC主要以蛇床子素（osthol）和欧前胡素（inperatorin）为主，目前已知的蛇床子提取物的化学成分可达40多种。蛇床子味辛苦，性温，具有散寒、祛风、杀虫等功能。用于湿痹腰痛、阴痒带下等。有关蛇床子的超临界CO2萃取工艺，日本学者宫地洋［1］对台湾产蛇床子进行过初步研究，以中国大陆部分产地的蛇床子为研究对象，广州市医药工业研究所的葛发欢等对其挥发性成分［2］和有效成分的萃取［3］进行过初探，山西省中医研究院的王永辉等［4］进行了萃取压力、萃取时间及CO2流量三因素对蛇床子素含量影响的研究。然而，影响超临界CO2萃取的工艺参数较多，且工艺参数间往往存在交互作用，为此，本文针对超临界CO2萃取全过程采用二次回归连贯设计法对五因素及其交互作用进行研究，确定了各因素及其交互作用对蛇床子素提取率的影响规律，从而得出回归方程，由此得出最佳工艺参数。 　　1 材料与仪器 　　材料：蛇床子购自江苏省姜堰市药材公司，经山西省中医学院中药鉴定室裴香萍、牛燕珍老师鉴定系伞形科蛇床属植物蛇床Cnidium monnieri(L.) Cuss的干燥成熟果实。将蛇床子粉碎至120目备用。CO2：太原天计应用化工有限公司生产，食品级，纯度在99%以上。蛇床子素的标准品购于中国药品生物制品检定所。实验装置：HA1215001C型超临界萃取装置（采用一萃二分流程），由江苏省南通华安超临界萃取有限公司制造。DF20型流水式中药粉碎机，由无锡中银机械制造有限公司制造。LC5500型高效液相色谱仪，UV检测器, 由北京市东西电子科技研究所制造。ME2.1型超声波清洗器，由美国Metter Electronics公司制造。 　　2 实验过程 　　2.1 超临界CO2萃取基本流程如下：CO2瓶→制冷系统→高压泵→萃取釜→分离釜Ⅰ→分离釜Ⅱ→（循环）。实验过程：称取120目蛇床子粉末200 g放入萃取釜中，对萃取釜、分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ、贮罐分别进行加热或冷却，当达到所选定的温度时开启CO2瓶，通过高压泵对系统进行加压，当系统压力达到所设定的压力时，开始循环萃取，保持恒温恒压，按照计算机设定的取料时间间隔为每10 min取1次料，从分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ出料口中取料。 　　2.2 蛇床子素含量的测定 　　2.2.1 色谱分离条件色谱柱为ODS（十八烷基硅烷）柱；流动相为甲醇水（8∶2）；流速为1 ml/min；检测波长为322 nm;柱温为35℃，进样量20 μl。在上述色谱分离条件下，用外标法测定蛇床子素的含量，其HPLC谱图见图1。 　　图1 蛇床子素高效液相色谱图（略） 　　2.2.2 线性关系考察 蛇床子素对照品采用归一化法对其纯度进行测定，结果为98%。精密称取蛇床子素对照品0.031 2 g，用95%乙醇溶解并定容至100 ml，得0.312 mg/ml的蛇床子素对照品溶液。分别量取上述蛇床子素对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml置于6个25 ml容量瓶中，用95%乙醇稀释至刻度，待测。根据浓度(X)-峰面积（Y）进行线性回归，回归方程：Y=2 747.47+1.550×107X，r=0.999 86 ，线性范围6.24~37.44 μg。 　　2.2.3 方法精密度实验精密称取蛇床子提取物5份，按本实验方法分别测定蛇床子素的含量，RSD为1.49%，表明方法精密度良好。 　　2.2.4 加标回收率实验精密称取已知含量的蛇床子提取物样