褪黑素对花萼海绵诱癌素诱导的tau蛋白过度磷酸化的影响_医学论文.docVIP

褪黑素对花萼海绵诱癌素诱导的tau蛋白过度磷酸化的影响_医学论文 褪黑素对花萼海绵诱癌素诱导的tau蛋白过度磷酸化的影响_医学论文 【摘要】 目的 探讨褪黑素(Mel)对花萼海绵诱癌素(CA)在成神经瘤细胞诱导的tau蛋白过度磷酸化的影响及其机制。方法 采用鼠野生型成神经瘤细胞(N2awt)，给予CA处理，或同时给予50μmol/L Mel处理，用免疫荧光检测tau蛋白磷酸化水平，32P特异底物标记技术检测GSK活性，免疫印迹技术检测P和GSK的表达水平，计算P的比率。结果 ①CA可在N2awt细胞使tau蛋白在Ser396/404位点和Ser198/202位点过度磷酸化，同时伴有GSK活性升高和P表达水平降低。②Mel对CA引起的tau蛋白过度磷酸化有保护作用；Mel同时对抗CA诱导的GSK活性升高和P表达水平降低。结论 Mel可减轻CA引起的tau蛋白过度磷酸化，其机制可能与调节细胞内P的表达水平和改变GSK活性有关。 【关键词】 花萼海绵诱癌素；tau；褪黑素；过度磷酸化；阿尔茨海默病 　　Effect of melatonin on calyculin A 　　ABSTRACT: Objective To investigate the in vivo effect of melatonin (Mel) on calyculin A(CA)or CA and 50μmol/L Mel, detected the level of tau phosphorylation with immunofluorescence, and assayed the activities of GSK3 and the ratio of GSK3β phosphorylated at Ser9 site to total GSK3β. Results CA treatment led to tau hyperphosphorylation accompanied with the increased activity of GSK3 and the decreased ratio of GSK3β phosphorylated at Ser9 site to total GSK3β. When the cells were incubated simultaneously with CA and 50μmol/L Mel, the CAinduced tau hyperphosphorylation, GSK3 activation and the ratio of GSK3β phosphorylated at Ser9 site to total GSK3β decrease were attenuated. Conclusion Melatonin protects neuroblastoma cells from CAinduced tau hyperphosphorylation. Its protection may be related to the regulation of GSK3 activity and the ratio of GSK3β phosphorylated at Ser9 site to total GSK3β increase. 　　KEY WORDS: calyculin A tau melatonin hyperphosphorylation Alzheimer 　　阿尔茨海默病(Alzheimer的主要病理特征是在患者脑神经元中有大量的神经原纤维缠结 (neurofibrillary tangles, NFTs)。NFTs主要由异常过度磷酸化的tau蛋白构成，引起AD脑内tau蛋白过度磷酸化的机制尚不清楚。大量研究揭示受损的神经元内的蛋白磷酸酶活性降低是一种可能机制。目前认为脑中调节tau蛋白磷酸化的主要蛋白磷酸酶是丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶家族中的PP，约占总tau蛋白磷酸酶活性的70%，而PP、PP和PP各约占10%[1]。花萼海绵诱癌素(calyculin A, CA)是PP和PP的特异性抑制剂。本研究组曾报道，在大鼠海马两侧注入CA后，大鼠出现了空间学习记忆障碍并且伴有CA1、CA2、CA3、CA4区tau蛋白的Ser396/Ser404位点的过度磷酸化[2]。作者曾报道，CA处理可使成神经瘤细胞(N2awt细胞)内的神经细丝发生过度磷酸化和PP活性降低，而同时给予褪黑素(melatonin，Mel)处理，则可对抗CA引起的上述变化[3]。糖原合酶激酶是可使tau的多个位点发生磷酸化的蛋白激酶[4]。根据报道GSK激活参与氧化应激诱导的tau蛋白磷酸化[5