牙龈卟啉单胞菌Hgp44基因的克隆表达与纯化.pdfVIP

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2017-08-17 发布于江西
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牙龈卟啉单胞菌Hgp44基因的克隆表达与纯化.pdf

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牙龈卟啉单胞菌Hgp44基因的克隆表达与纯化.pdf

·735· ．牙体牙髓病学研究．牙龈卟啉单胞菌Hgp44基因的克隆表达与纯化张杰崔红花张绮霞韩曙光陈晖【摘要】目的克隆表达牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gin#valis，Pg)牙龈素中黏附素区域的Hgp44基因，并纯化目的蛋白。方法通过聚合酶链反应(PCR)和基因重组技术。克隆得到 PgATCC33277的89#4基因，插入到克隆载体pMDl8-T中并测序鉴定。经过酶切后将目的基因片段与表达载体pET22b相连，构建出表达质粒pET22b—rIsrm。将重组质粒转化到感受态细胞BL21 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白质印迹法进行分析。用固定化金属亲和层析法对重组蛋白进行分离纯化。结果目的基因片段约为1100 bp，与预期大小相符，测序结果与GenBank中ATCC33277国际标准菌株的ttspA的等位基因序列U15282一致。IPTG诱导后的菌体经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳后形成一个以包涵体形式存在的44000的融合蛋白。蛋白质印迹法检测证实其具有免疫原性。用镍离子金属螯合层析柱纯化出了目的蛋白，最后得到约3．5ms／L的目的蛋白。结论成功克隆表达了 P#sp44基因，并纯化出了目的蛋白。【关键词】紫单胞菌，龈；克隆，生物；牙龈素；原核表达 and of from ZHANG Cloning m．CUI expressionHgp44 Porphyromonas丽n#vaUs Hong—hna， ZHANG and Shu-guang，CHENHui‘．。DepartmentofOperativeDentistryEndodontics， Qi-xia，HAN 310006，China HospitalofStomatology，CollegeofMedicine，ZhejiangUniversity，Hangzhou author：CHENHui，Email：huic66@hotmaiLcorn，Tel：0086-571-872J7437 Corresponding Tocloneand the of inadhesindomainsof 【Abstract】Objective expressgeneHgp44 gingipains the The DNA was from to of Porphyromonasgingivalis(Pg)andpurifyprotein．Methodsgenomic Pg isolatedfrom Was chain reaction(PCR) PgATCC33277．TheHg#4genefragmentamplifiedbypolymerase andtheninsertedintothe vector and correct WaSlinkedwitha fragment cloning pMDl8一Tsequenced．The