吸烟致大鼠慢性支气管炎形成过程气道上皮ICAM-1表达的探究.pdfVIP

大寺点言 上海市医学会2002年肺科学术年会 吸烟致大鼠慢性支气管炎形成过程气道 上皮ICAM一1表达研究 上海第二医科大学附属瑞金医院肺科200025 李庆云黄绍光程齐俭 曲仪庆李敏邓伟吾 ’肾脏科周 同 外科陈国庭 病理科 吴华成许海敏 大慢性支气管炎形成和发展过程中，上皮细胞也是一种效应细胞，其通过表达细胞 间粘附分子一1(ICAM一1)与中性粒细胞表达的整合素结合，从而起到介导炎症的作用。 本研究在慢性支气管早期炎症的形成和发展过程中ICAM一1的表达情况，为适时采取免 疫阻断治疗措施提供初步理论依据。 材料和方法 一、动物分组和模型的建立 雄性SD大鼠30只(购于上海西普尔·必凯实验动物有限公司提供)，体重150～ 1809。随机分为5组，每组6只：A组：暴露于刺激物1周，即取标本；B组：暴露于刺激物 3周，即取标本；C组：暴露于刺激物5周，即取标本；D组：暴露于刺激物7周，取标本(典 型病理变化组)；I组：不予任何刺激饲养至7周(正常对照组)。 大鼠慢支模型的建立：混合烟雾吸入法建立模型。在15m3的烟室中，以锯末1109、烟 支系列发展模型。其中出现间质性肺炎的动物则剔除。 二、标本采集及处理，光镜下行外周血、BALF白细胞计数及分类，小气道病理变化 的半定量评分及MPO测定分别见文献。 三、SP法测定气道上皮ICAM一1表达 石蜡切片以二甲苯脱蜡及系列酒精至水PBS洗5分钟；3％H：O：孵育切片10分钟 (室温)；PBS洗3次，每次5分钟；抗原修复，0．01mol／L 30 pH6．0的柠檬酸缓冲液96‘C 分钟；PBs洗3次，每次5分钟；以封闭血清加切片，并在37℃湿盒中温育20分钟；吸去封 一76— 大会发言 上海市医学会2002年肺科学术年会 闭剂，勿洗；加稀释浓度为1：100的小鼠抗大鼠ICAM—l单克隆抗体(购至深圳晶美试剂 reagent 钟～10分钟；苏木素复染细胞核；脱水，透明，封片。注每次实验均以磷酸盐缓冲液代替 一抗设立阴性对照；以血管内皮细胞阳性表达作为阳性对照。 四、结果判定 光学显微镜下，每张切片选取直径大约100～300／xm的气道作评价，细胞表面出现 棕黄色颗粒为阳性，计数ICAM一1表达阳性气道上皮细胞占整个周径的百分比，分为5 (++++) 五、统计学分析 组间ICAM一1表达阳性等级比较使用RIDIT分析，各种指标间应用其评分及阳性比 率的平均值进行相关性分析。均为双侧检验，P≤o．05为有统计学意义。 结 果 一、光学显微镜下所见 图1，2显示ICAM一1在气道上皮细胞的阳性表达。 图1D组(7周组)大鼠小气道上皮ICAM一1阳性表达，阳性颗粒位于支气管粘膜上 皮细胞的细胞膜。(SP法×400) 达为阳性对照。(SP法×200) 二、大鼠慢性支气管炎形成过程中不同时期ICAM一1的表达 在慢性支气管炎形成过程的各阶段，气道上皮细胞ICAM一1的表达不同，见表1。 三、ICAM一1表达与慢支病理评分，白细胞浸润以及MPO的相关性分析 相关性分析：慢性支气管炎大鼠特征性炎症形成过程中，小气道ICAM一1表达与病 大奇发言 上海市医学会2002年肺科学术年会 其中，A、B两组与对照组I组相比，A组与B组、B组与C组相比无显著性差异，po．05 C、D两组与对照组I组相比有显著性差异，U一2．7430和4．4439，P0．0