七叶皂苷诱导HL-60细胞调亡地研究.pdfVIP

月)地处理细胞，使GP抗原随着巨核细胞的分化成熟而明显增加。至于两种细胞本身和PDS处理 后细胞GP表达高低的不同，取决于细胞的异质性，及对PDS的敏感性程度的不同。 条，两种不同的细胞显示相同的基因表达规律。与细胞分化有关的干扰素诱导的C5—4基因和G0／ Gl期调控基因GOS8，在两细胞中都被PDS诱导而上调表达。其他的上调基因均主要分布在造血细 胞相关基因、受体及其相关基因、转录调控因子基因、细胞内信号传递介导蛋白类基因。其中包括 G一蛋白偶联的受体及其结合蛋白、锌指蛋白、肿瘤抑制基因p53结合蛋白等。 PDS是人参总皂苷中促进造血的有效成分，不但作用于造血祖细胞，而且具有诱导巨核细胞系 力证据。 七叶皂苷诱导HL一60细胞调亡的研究 成 志 高瑞兰金锦梅 陈小红钱煦岱 浙江中医学院附属医院杭州310006 目前肿癯和白血病化疗所采用的细胞毒药物，多数具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用，但传统化疗 的毒副作用大，且易产生耐药性。天然药物与化疗药物相比毒性低，副作用小，骨髓抑制轻，具有 改善宿主的免疫反应和加速骨健再生等优点。七叶皂苷(从天师栗的成熟果子中提取)具有消炎、 抗渗出、恢复毛细血管通透性、提高静脉张力、改善血液循环、促进脑功能恢复及神经保护等作 用…。有实验表明七叶皂苷对人鼻咽癌细胞增殖具有明显抑制作用，且呈剂量和时间的依赖性，但 作者没有观察到诱导鼻咽瘸细胞凋亡的效应01，有关七叶皂苷诱导肿瘤细胞或白血病细胞凋亡的研 究尚未见报道。本实验室从多种中药提取物中筛选出对白血病细胞具有抑制作用的七叶皂苷，观察 其诱导m一60细胞凋亡的作用，为七叶皂替的临床作为自血病的辅助治疗剂提供实验依据。 材料和方法 1细胞m广_60细胞购自上海中国科学院细胞所。 2药糟七叶皂苷注射液由绿叶制药股份有限公司生产，从中药天师栗的成熟果子中提取。 素(100 好的生长状态。 4药糟诱导细胞凋亡试验七叶皂曹以IMDM培养液配成所需浓度的工作液。取对数期生长 物的为对照组，均接种于250ml培养瓶。 5细胞存活翠测定细胞与药物孵育24小时后，分别收获各组细胞，加入台盼蓝染液至终浓 度为O．4％，染色2—5min后，滴片．计算细胞存活率。 6形态学观察取各组细胞悬液，经离心沉淀涂片机涂片后，瑞一吉染色后，油镜下观察细 胞形态。 7 ArmexinV／PI双标分析凋亡细胞的百分率收集各组细胞105／管，用冷PBS洗涤2次，细胞 186 HEPES／NaOH、140retool／L1 重悬于1009l的Binding缓冲液(10mmol／L N8cL、2．5mmol／LCaCL． Annexin Ph7．4)，然后加入5,ttl 400一Bir,ding缓冲液，lh内用流式细胞仪分析。 8 DNA摄取及凝胶电泳分析细胞DNA提取及电泳按照本室以往的报道Ⅲ。5×106细胞经冷 EDTA、1tool／L PBS洗涤后．加人50出细胞裂解液(1％NP一40、0．5mol／LTris．HCL，pH7．5)作用 后收集上清，重复提取1次，合并上清共100一，加入50出浓度为lO,u∥pI的RNAaseA和16．7m的 Tris．HCL．1mol／L EDTA，Ph 凝腔上电泳2—3h，紫外光下观察并摄影，同样的实验重复3次。 9统计学方法 每组资料数据用X±s表示，备组闻差异使用sPss软件包进行方差或t检验分析。 结 果 1七叶皂苷作用后HI．一60纲胞活性梭翻结果表l显示七叶皂苷能显著降低细胞存活率，存 低，且剂量越大，存活率下降的速度相应加快。 裹1七叶皂昔对lIL一∞龋臆存嚣搴的髟晌(n；6) 药物浓度 药物处理后细臆存活率(％) n叫L 24h矬理481,处理 - 表示与对照组相比(P0．01) 后，形态观察细胞体积大小均匀、胞膜完整，胞浆颗粒多，核腊清晰，可见核仁