联合转染tPA基因与反义PCNA寡核苷酸抑制兔自体移植动脉再狭窄研究.pdfVIP

第十一届全国普外基础与临床进展学术大会论文忙编 ．99． 联合转染tPA基因和反义PCNA寡核苷酸 抑制兔自体移植动脉再狭窄研究 浙江大学医学院附属第一医院普通外科(杭州310003昊忠均 郑树森 重庆医科大学附属第一医院血管外科(重庆400016)时德余林 随着各种血管成形术(冠状动脉旁路移植 pBudCE4．1／tPA由本研究所构建并保存；总 术等)的迅速发展，大大提高了血管闭塞性疾病 RNA提取试剂盒、RT-PCR试剂盒购自北京博 患者的生存质量，然而遗憾的是血管成形术后 大泰克生物技术有限公司；Lipofection脂质体 (LP)购自Gibico 出现的再狭窄(restenosis，RS)严重影响着术后 BRL公司；tPA发色底物法 远期疗效。因此，如何抑制血管内膜增生进而 检测试剂盒、抗PCNA单克隆抗体、S-P试剂盒 阻止血管RS是近年来心血管内外科医师努力 购自福州迈新公司；其余为国产分析纯。 探讨的课题，尽管科研人员从手术操作技术和 1．1．2实验动物及分组健康雄性新西兰纯 手术方案的改进及药物的干预等方面人手，试 种兔120只，体重】．8～2．7(平均2．3)kg，由第 图解决血管RS问题，但均耒取得满意的疗效。 三军医大学动物中心提供，分笼饲养，随机分为 随着分子生物学技术的飞速发展，转基因技术 和反义核酸技术在心血管疾病防治中的作用已 初见端倪。大量研究发现血管RS的发生发展 过程中涉及多种基因素的异常表达，许多学者 在以往的研究中想通过调控某一基因来阻止 2w、4w和8w分为5个亚组，每个亚组6只兔 子(12条血管)。 RS的发生发展，但效果欠佳。本研究中针对血 1．2方法 管成形术后血栓形成及血管平滑肌细胞(vas— 1．2．1 cularsmoothmuscle cell，VSMC)增殖、迁移 的设计及夸成从medline上的基因文库中查 和分泌细胞外基质是Rs发生的主要病理过 到tPA基因和PCNA基因序列，根据引物和 程，拟建立兔右髂动脉移植模型(损伤模型)，在 AODN设计原则，设计一对扩增1．9kb的tPA 移植动脉壁联合转染组织型纤溶酶原激活物 基因的引物和18个碱基的PCNA—AODN，扩 (tlss—type activator，tPA)基因和 plasminogen cell nuclearan 增殖细胞核抗原(proliferating ， oli— tigen，PENA)反义寡核苷酸(antisense (Hind m)，P2：5’一GCCGGATCCAGG— godeoxynucleotide，AODN)，试图抑制血栓形 一 成和血管壁VSMC的增殖和迁移，减轻内膜增 (BarnH 生，期望用“鸡尾酒”样策略进行多重干预阻止 RS的发生发展，为