茎用芥菜细胞质雄性不育系与其保持系线粒体atp9基因RNA编辑位点的研究.pdfVIP

茎用芥菜细胞质雄性不育系及其保持系线粒体atp9基因 RNA编辑位点的研究 扬景华张明方 (浙江大学园艺系，杭州310029) 摘要：以茎用芥菜(榨菜)不育系及保持系为材料，通过}匕较研究线粒体atp9基凼RNA编辑。结 果表明，正常可育榨菜中atp9基因有4个位点的发生编辑，编辑频率为54％，而在榨菜不育系花蕾中， 三个位点编辑的缺失导致atp9基因编码的蛋白质疏水性的降低。同时，正常可育榨菜中atp9基因的RNA 编辑呈发育特异性，幼嫩组织中完全编辑，衰老组织中部分编辑，不育系中花蕾与幼嫩及衰老的根中部分 编辑．叶片中呈发育特异性。 关键词：细胞质雄性不育；茎用芥菜；atp9：RNA编辑 细胞质雄性不育是植物中比较普遍的遗传现象，在作物杂种优势利用中有着重要应用价值。利用 雄性不育既可以省去人工去雄的工序，又可以保证杂交一代种子的纯度，同时它又是研究花粉发育、 细胞质遗传和核质互作的良好的系统。目前，在玉米【1，2】、小麦[3]、水稻【4～6】，矮牵牛【71以及向日 葵[8，9】等植物中有关雄性不育机理以及雄性不育系利用的研究已经有了跃足的进展。 十字花科作物存在着明显的杂种优势，目前杂种一代的生产主要是利用自交不亲和性和雄性不育 性两种途径。迄今为ft，十字花科作物中许多重要的经济作物，如白菜[10、11】、甘蓝【12】、榨菜『13】、 甘蓝型油菜【14，15]等都选育出综合性状良好的雄性不育系。细胞质雄性不育由于其理论上可以获得 100％不育度和不育率的材料，因此，在十字花科作物优势育种利用中有着更广阔的前景。 茎用芥菜(榨菜)是中国的特产蔬菜，在浙江和四川等地有着广泛的栽培，自交亲和指数非常高， 生产上存在病毒病严重和品质下降等问题，而杂种优势的利用可以改良现有芥菜品种的品质及提高抗 性。我们以茎用芥菜(榨菜)不育系及保持系为材料，通过比较研究线粒体atp9基因RNA编辑。结 果表明，正常可育榨菜中atp9基因有4个位点的发生编辑，编辑频率为5．4％，而在榨菜不育系花营中， 三个位点编辑的缺失。同时，正常可育榨菜中atp9基因的RNA编辑呈发育特异性，幼嫩组织中完全 编辑，衰老组织中部分编辑，不育系中花蕾与幼嫩及衰老的根中部分编辑，叶片中呈发育特异性。 1材料与方法 1．I供试材料 陈竹君、张明方等[13】通过远缘杂交和回交的方法选育了综合经济性状优良的榨菜细胞质雄性不育 系(CMS系)，其高世代回交系(BCl3)及其保持系可以作为近等基因系，用来比较研究，本试验所 用材料即为榨菜不育系(BCl3)及其保持系不用部位和发育时期组织。 1．2基因组DNA的分离 基因组DNA的提取采用常规CTAB方法[16]。 1．3总RNA的分离及eDNA的合成 和随机引物的作用下，合成eDNA第一条链，用于后续PCR反应，备步骤严格按照试剂盒说明进行。 1．4PCR反应及产物的克隆和测序 参考拟南芥(Genebank登录号：NC 499 TCAGAATACGAATAAGATCA。上述引物均有上海生工生物工程公司合成。 9C预 以基因组DNA及不用部位和发育时期eDNA为模板，扩增atp9基因。PCR反应条件为：94 s，72C延伸1．5 min。PCR 变性3rain后，94。C变性30s，50。C退火45 rain，35个循环后72。C延伸10 产物进行1％琼脂糖凝胶电泳检测。PCR产物连接到pGEM-T 至大肠杆菌DH5u中，重组质粒经上海生工生物公司测序，得到目的基因的序列，对所测序列进行分 析。 1．5RNA编辑分析 通过比较基因组DNA及eDNA的序列，确定RNA编辑的情况，RNA进行编辑的位点用‘‘+”记， 缺失编辑的位点用“-”记。 2结果与分析 2．1线粒体atp9基因的RNA编辑 的编辑使氨基酸从脯氩酸(P)变成亮氮酸(L)，结果氨基酸从丝氨酸、脯氨酸变成亮氨酸增加了氨 氨基酸从异亮氮酸变成苏氨酸增加了基冈的保守性。