人参皂甙Rb1对小鼠小肠Cajal细胞与平滑肌细胞电生理影响的研究.pdfVIP

2012广东省中医、中西医结合脾胃消化病学术会议论文汇编 感；气虚故而排便费力、形体消瘦。是以用香砂六君子汤为底方益气健脾，行气化湿。方中 加入大量之黄芪既可加强补中之力，又可升清以降浊，改善大便无力、不畅的症状。厚朴、 枳实二味既善行气化湿消痞，又可通腑，且与黄芪一升一降，共同调节气机的升降紊乱。元 胡可加强行气止痛之力，又可畅通血脉以防气机久滞影响血行之弊。合欢皮安神宁心，促进 睡眠。另外，嘱咐患者在饮食上进行调节治疗，从而可达到对因治疗之目的。 人参皂甙Rbl对小鼠小肠Cajal细胞及平滑肌细胞电生理影 响的研究 黄穗平’徐蕾2 1广东省中医院(510120) 2中山市中医院(528400) 近年来，运用胃肠动力学研究中医药成为热点。许多研究证明部分中药复方、单方、提 取物、单体等具有参与调节胃肠动力的作用。 人参是健脾益气的主要中药。从人参中分离出来的人参皂苷被认为是人参主要的有效成 活性。但Rbl对胃肠道动力学的影响机制尚不完全明确。 本研究在细胞学水平上观察了人参皂甙Rbl对培养的小鼠小肠Cajal细胞起搏电流影 响：在组织学水平实验与细胞学水平实验上观察了Rbl对ICR小鼠小肠平滑肌自发性收缩的 影响并探讨了其机制。现报告如下。 第一部分人参皂甙Rbl对培养的小鼠小肠Cajal细胞 起搏电流影响的研究 l材料略 2实验方法 2．1小鼠小肠Cajal问质细胞的分离培养(如图1，略) 2．2小鼠小肠Cajal间质细胞的鉴定免疫组织学 2．3膜片钳实验技术 3结果 3．1培养的ICC细胞的鉴定 3．1．1培养的小肠Cajal问质细胞的形态学观察 培养ICC24--72h后，在倒置显微镜下观察，可见已贴壁生长的细胞，或单个分散生 长，或以网络式样生长，或以小肠组织碎片为中心向四周辐射状生长出成团的细胞。这些细 胞具有共同的形态特征，胞体呈三角形或梭形，细胞核大，核周有少量的胞浆，胞质内有许 多黑色糖原颗粒，从胞体上发出2～4条长突起，并与邻近细胞胞体或ICC突起相互连接成 网络状(图2，略)。 101 2012广东省中医、中西医结合脾胃消化病学术会议论文汇编 3．1．2培养的小肠Cajal间质细胞的免疫学鉴定 为了确认在体外培养的细胞是否是Cajal间质细胞，采用国际上通用的C-Kit蛋白免 疫染色法对培养的细胞进行鉴定。对培养48-72h后的细胞进行免疫荧光染色，并在荧光显 微镜下观察。结果表明，培养的绝大部分细胞表面酪氨酸激酶受体C-Kit蛋白的表达呈阳 性，胞体和突起均明显着色。而且，C-Kit蛋白表达阳性的细胞具有明显的Cajal间质细 胞的形态学特征。 3．2ICC细胞正常电流 采用膜片钳技术来记录培养的ICC细胞的起搏电流。在传统的全细胞膜片钳记录模式 下，将膜电位钳制在一60mY，记录小肠ICC的起搏电流。结果表明，在小单个ICC和网络 ICC上，均可以记录到自发并具有节律的内向性电流(图3)。 Aa b 图3ICC细胞正常电流图 3．3人参皂甙Rbl对培养的小鼠小肠Cajal细胞起搏电流影响 采用膜片钳技术来观察Rbl对培养的ICC细胞的起搏电流的影响。结果表明，不同浓度 Rbl6umol!L 对培养的ICC细胞的起搏电 百 二 ^ 20● 电流影响 40S 图5人参皂甙Rbl对Cajal细胞起搏电流影响