油松成熟胚培养微繁技术体系的探究.pdfVIP

∗ 油松成熟胚培养微繁技术体系研究 1 1 2 孔冬梅 万婷 王爱芝 1 2 （山西大学生命科学学院，山西 太原 030006； 东北林业大学生命科学学院，黑龙江 哈尔滨 150040） 摘要：油松 （Pinus tabulaeformis Carr. ）是中国特有树种，也是我国北方最重要的森林树种 之一，目前林业上所用的实生苗和优树嫁接的繁殖方法远不能满足生产的要求，组织培养对 其无性快繁、优良林木生产和基因工程育种等具有重要意义。油松成熟胚培养诱导不定芽发 生和植株再生的研究曾有过零星报道，但不定芽和不定根的发生率都很低，且报道结果难以 重复。本文在前人研究基础上，以油松成熟合子胚为外植体进行离体培养，目的在于优化油 松成熟胚培养不定芽和不定根诱导条件，通过直接器官发生途径建立稳定的油松植株再生系 统。研究结果如下： （1）添加适当植物生长调节物质的 MS 和 DCR 培养基均能诱导油松不定芽发生，但 DCR 培养基上不定芽诱导率显著高于 MS，每个外植体上发生的不定芽数也多于MS 。 （2 ）在DCR 培养基中添加 0, 1, 2, 5 or 10 mg·L- 1 2,4-D 与 0, 1, 2, 5 mg·L-1 BA 的不同组 合进行不定芽诱导，发现植物生长调节物质的种类和浓度对油松不定芽诱导具有显著影响（p ＜0.05 ），只有添加BA 的培养基才能诱导不定芽发生，而2,4-D 对油松不定芽的形成具有抑 -1 制作用。当培养基中只添加 1 mg·L BA 时，不定芽诱导率最高，为 90%，显著高于其它处 理（p ＜0.05 ）。 （3 ）及时将不定芽继代于不含植物生长调节物质的DCR 培养基上有利于芽的伸长。 （4 ）生根培养选用添加一定浓度NAA 或 IBA 的 1/2MS 和 1/2DCR （标准基本培养基 大量元素减半）培养基，结果发现不同培养基诱导生根效果不同。1/2MS 培养基上没有不 定根发生，而NAA 更有利于促进愈伤组织的形成。不定根只发生于添加 IBA 的 1/2DCR 培 - 1 养基上。在添加 1 mg·L IBA 的 1/2DCR 培养基上不定根的诱导率最高，达到 47.1% 。 （5 ）至少具有 1 条长度达到 3 cm 根的健康小植株炼苗容易成功。炼苗时，先将封口膜 揭开，2-3 d 后将小植株移出来，小心洗去附着的培养基，栽植于灭菌蛭石，植株外面罩以 塑料薄膜以保持湿度。2 周后，逐步撤去塑料薄膜，直至小植株完全暴露于自然条件下。再 生植株在蛭石基质上炼苗后转到温室培养，2 个月后成活率高达 86.4%，且生长正常。 通过优化研究建立了稳定的油松离体培养植株再生技术体系。即，以成熟胚为外植体， 在添加 30 g·L- 1 - 1 - 1 蔗糖，1 mg·L BA，6 g·L 琼脂的培养基上诱导培养 4 周，转入相同成分新 鲜培养基再培养 4 周；将诱导的不定芽转入不含生长调节物质的DCR 培养基进行伸长培养， 每 4 周继代一次；2 cm 以上的不定芽在添加20 g·l-1 蔗糖, 1 mg·L- 1 IBA 和 6 g·L- 1 琼脂的 1/2DCR 培养基上诱导生根；再生植株瓶内炼苗 3d 后移栽于灭菌蛭石中，期间注意环境条 件的逐渐过渡，尤其是湿度的保持。用该体系经 25 周培养，每粒种子可获得至少 10 株再 生苗。 关键词：油松；不定芽；生根；炼苗 油松(Pinus tabulaeformis Carr.)是中国特有树种，也是华北最重要的森林树种之一，具 有耐干旱、耐盐碱、耐瘠薄的抗性优势。油松还是世界重要的木材和松脂生产资源，其花粉 则是优良天然保健品。目前林业上主要依靠实生苗和优树嫁接的繁殖方法，繁殖系数低，