蛋白质含量测定法考马斯亮蓝法.docVIP

蛋白质含量测定法——考马斯亮蓝法 [实验目的] 学习、掌握考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋白质含量的方法 [实验原理] [器材与试剂] 器材 722型可见光分光光度计、漩涡混合器、试管16支 试剂 1.标准蛋白质溶液，用牛血清清蛋白（BSA），配制成1.00mg/ml。 2.考马斯亮蓝G-250染料试剂：称100mg考马斯亮蓝，溶于50ml 95%的乙醇后，再加入120ml 85% 的磷酸，用水稀释至1升。 [实验方法] 标准方法 1.取10支试管，分别编号后按 表1 剂量依次加入标准蛋白（或未知蛋白）、去离子水和考马斯亮蓝染料。每支试管加完后，立即在漩涡混合器上混合。 2.加完染料20min后，使用722分光光度计，塑料比色皿，在595nm处测量吸光度A595。 3.用标准蛋白浓度（mg/ml）为横坐标，用A595为纵坐标，进行直线拟合，得到标准曲线。根据测得的未知样品的A595，代入公式即可求得未知样品的蛋白质含量。根据所测样品的吸光度,在标准曲线上查得相应的蛋白质含量,按下式计算: 样品蛋白质含量(μg/g鲜重) = SDS干扰实验 1.取5支试管，分别编号后按表2剂量依次加入标准蛋白、SDS、去离子水和考马斯亮蓝染料。每支试管加完后，立即在漩涡混合器上混合。 2.加完染料20min后，使用753分光光度计，塑料比色皿，在595nm处测量吸光度A595。 [实验数据与