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质粒DNA的转化及鉴定 2011年4月 试剂与器材 试剂 LB培养基；0.1mol/LGaCl2；甘油；LB抗生素平板（均为灭菌的） 器材 恒温培养箱 实验步骤 细菌感受态的制备： Top10菌株培养过夜，以1:100比例接种培养3小时，冰浴30min，分装于EP管，2500rpm 4℃离心4min。 弃上清，沉淀重悬于1ml预冷0.1mol/L CaCl2 ，冰浴15min，2500rpm 4℃ 离心4min。 弃上清，沉淀轻悬于0.2ml预冷0.1mol/L CaCl2 (此时细菌易破碎)，置冰浴。 转化： 加入质粒DNA 20?l，冰浴30min。 42℃热冲击2min ，迅速冰浴2min。 加1ml Amp－ LB培养基，37℃振荡培养1小时（250rpm/min）。 取Amp+LB平板，用40?l Ｘ-gal(20mg/ml)、4?l IPTG(200mg/ml)均匀涂于平板上。 取20-50?l培养产物涂Amp+平板。 倒置平板，37℃培养过夜，观察蓝白菌斑。 Blue White Screening