从急性脑缺血再灌动态损伤过程及中药干预作用探讨毒损脑络的生物学基础.pdfVIP

2010年国家中医药管理局脑病重点研究室建设研讨会暨中风病科研成果推广交流会论文汇编 261 中风病·实验研究 从急性脑缺血再灌动态损伤过程及中药干预作用 探讨毒损脑络的生物学基础 张允岭1★ 刘雪梅1刘超1柳洪胜2娄金丽3王新祥1陶冶1郑宏1黄启福4 (1北京中医药大学东方医院，北京，100078；2北京大学人民医院，北京，100044； 3首都医科大学附属北京佑安医院，北京，100069； 4北京中医药大学基础医学院，北京，100029) 摘要：目的急性脑缺血再灌后炎性因子、血管活性物质、细胞凋亡的动态变化和心脑 舒通胶囊的干预作用，以探讨毒损脑络的生物学基础。方法实验一采用线栓法阻塞大脑中 动脉致大鼠局灿陛脑缺血再灌模型．随机分为：假手术组，脑缺血1．5h后再灌3h、6h、12h、 24h、48h、72h各组，共7组。HE染色和尼氏染色观察脑组织形态学变化和损伤状况；TUNEL 法测定脑缺血损伤区神经细胞凋亡的变化。实验二采用线栓法阻塞大脑中动脉致大鼠局灶性 脑缺血再灌模型。随机分为3组：假手术组，脑缺血1．5h后再灌24h模型组，心脑舒通胶 囊治疗组。HE染色和尼氏染色观察大脑皮层区神经元形态学变化；透射电镜观察神经细胞 超微结构改变；TUNEL法测定皮层区神经细胞凋亡的表达；生化法检测患侧大脑组织中MDA、 测定大脑皮层内Caspase-3基因的表达．结果实验一脑缺血1．5h再灌不同时间，大鼠脑 组织内出现不同程度的病理损伤．HE染色和尼氏染色发现神经元细胞间隙增宽，水肿明显， 有核固缩等现象。脑组织病理损伤趋势在再灌12h一48h内最为显著。皮层6-keto-PGF，。和 VEGF、VEGF2基因表达均呈现上升趋势，于24h升至高峰；VEGF蛋白表达亦呈上升趋势，于 最高峰。实验二心脑舒通胶囊可明显改善神经元水肿等现象。升高缺血侧脑组织中SOD活 力，降低MDA、LD含量和LDH活力；减少TNF-Q和IL-IB含量，降低6一keto-PGF，。和TXBz Bcl-2蛋白表达和Bcl-2／Bax比值；显著减少凋亡的神经细胞数量．结论急性脑缺血后再 灌不同时间可以诱发不同程度的脑组织损伤，炎性因子过表达，血管活性物质失衡和细胞凋 亡，损伤的严重程度多集中于再灌24h．提示急性脑缺血再灌病理过程中存在动态变化的脑 262 中风病·实验研究 络损伤机制，表现为从毒生脑络损、脑络损生内毒，正邪交争、胜负消长．心脑舒通胶囊可 以有效降低氧自由基损伤、炎性因子表达，维持血管活性物质比例，调节各种凋亡调控因子 的表达，明显减轻急性脑缺血病理损害。不仅证明了氧自由基、炎性因子等毒性效应的存在． 又因毒邪损害具有败坏形质和不可逆转特性，所以治疗上难以完全逆转急性缺血损害的病理 过程；反证出毒损脑络是急性脑缺血损害关键病理环节． 关键词：脑缺血；再灌；毒损脑络；心脑舒通胶囊 急性脑缺血再灌损伤是一复杂的病理生理过程。近来研究发现，脑血流中断和再灌使脑 的组织、细胞产生损伤是一个快速的级联反应。这个损伤级联反应包括氧化应激、能量代谢 障碍、细胞内钙超载、炎症反应、细胞凋亡等一系列病理损伤链。这些环节往往相互因果， 相互影响，在发生的时间上彼此重叠并互相联系，形成恶性循环，最终导致细胞凋亡或坏死。 实验研究和临床研究均表明，中医药理论和干预在脑缺血再灌损伤方面起着重要的作用。 急性缺血性脑血管病属中风病范畴，针对其多因素、多环节具有“毒性效应”的病理损 伤链，以及神经细胞的凋亡、坏死之结局，王永炎院士提出毒损脑络的理论观点，是对中风 病传统病因病机认识的提升与创新。其物质基础涵盖了血管活性物质调控异常、血管内皮和 平滑肌细胞的损伤，细胞因子及信号转导通路调控异常等细胞、亚细胞结构、活性蛋白、基 因多个层面组成的信息网络的异常变化，是一个动态的、多维的、开放的复杂系统。科学阐 释其内涵，开展相关的生物学基础研究，对全面认识急性缺血性脑血管病具有重要的现实意 义。 本系列研究均采用线栓法致大鼠大脑中动脉阻塞导致急性脑缺血再灌模型，动态观察炎 性因子、血管活性物质、细胞凋亡的变化，结合形态学了解其病理改变，动态观察急性脑缺 血再灌损伤过程的变化规律；选用心脑舒通胶囊进行干预，从氧化应激、炎性因