一株脂肽产生菌发酵参数的响应曲面法优化.pdfVIP

第3()卷第4期 海洋科学进展 V01．30NO．4 2012年10月 ADVANCESINMARINESCIENCE October。2012 一株脂肽产生茵发酵参数的响应曲面法优化 单大鹏1’2～，李 旭1’2～，产竹华1’2”，刘洋1’2”，邵宗泽1’2’3。 (1．国家海洋局第三海洋研究所，福建厦门，361005；2．国家海洋局海洋生物遗传资源重点实验室，福建厦门，361005； 3．福建省海洋生物技术重点实验室，福建厦门，361005) 摘 要：从渤海污染土壤中分离的表面活性剂产生菌，经鉴定为Bacillussp．B02，该菌在对数生长期产生表面活 性剂，至稳定期后可将发酵液的表面张力降低至31．0mN·In～。初步分析发现其表面活性剂成分为环脂肽，该脂 肽在不同温度、盐度、pH条件下有较好的稳定性。进一步采用响应曲面法(RsM)，以乳化系数作为响应值来优化 菌株B()2产生物表面活性剂培养条件。还通过实验确定碳源(液体石蜡)、NH；N()。、KH。P()，为3个影响表面活 性剂产量的显著因素．再进行发酵培养基优化，获得最佳培养基配方。获得的发酵参数为利用该菌株发酵生产生 物表面活性剂提供数据，为石油降解菌的应用开发提供了有价值的信息。 关键词：生物表面活性剂；芽孢杆菌；响应曲面法(RSM)；Plackett—Burman设计；Box—Behnken设计 0575一12 中图分类号：Q939．9 文献标识码：A 文章编号：1671-6647(2012)04 石油是土壤及海洋中的重要污染物之一，海洋溢油将经历溶解、挥发、光化学氧化分解、吸附、沉降、以及 生物降解等一系列过程，其中生物降解是彻底消除油污的最重要途径，利用微生物降解作用来主动清除溢油 的生物修复技术是当今非常重要的环境生物技术u一。生物表面活性剂具有渗透、润湿、脱附、乳化、增溶、稳 泡和消泡等作用∽j，有助于溶解难溶的石油烃化合物，提高石油烃污染物的降解率，因而在石油污染的治理 中具有很好的应用前景¨J。在复杂环境条件(高盐、酸碱、高温等)下，仍能保持乳化作用的生物表面活性剂 将具有更广泛的适用性。 生物表面活性剂的分子结构包括非极性的疏水部分和极性的亲水部分，具有两亲性质¨…，其疏水部分 为饱和、不饱和或羟化的烃链；其亲水部分有多种形式，如糖类、氨基酸类、环状肽类、磷酸盐、醇等，它们一般 都具有良好的降低表面张力和界面张力的性能[6J。生物表面活性剂最主要的是脂肽、糖脂、磷脂等，其中脂 肽一般为胞外产物，离去菌体后存在于上清或者疏水层中[7引。现在发现的脂肽主要来自Bacillus属，如 fluores— ce#ls，Serratia#Ylarcescens等19。 生物表面活性剂一般产量很低，纯化成本高，因而限制了实际应用¨…。优化发酵工艺是提高生物表面 活性剂产量的主要途径之一。PlackettBurman法可以从多个因素中快速确定其中最为关键的发酵参数， 方面最为有效和准确¨川。响应面分析法中的Box—Behnken中心组合设计是一种三水平的实验设计法，适用 于2～5个因素的优化实验u…。由于该方法的试验次数均在因素数的4倍以上，一般都能获得良好的拟合 结果Ⅲ!。 13 收稿日期：2010-05 资助项目：国家海洋局第!海洋研究所琏本科研业务费项目 产芽孢打油降解菌的分离‘j鉴定(海i科2009042)；罔家海洋局青年 海洋科学基金项目 海洋微生物表面活。陀物质发酵制备T艺研究(2011142)；福建省自然科学基金项目…海岸带石油降 解微生物资源的初步研究(2010J01206)。 作者简介：单大鹏(1980一)，男，IlJ东滨卅1人，硕士．助理研究员，主要从事海洋微乍物资源应用开发方面研究． *通讯作者，E-mail：shaozz@163．c。m