二氮嗪预处理减轻大鼠海马神经细胞缺氧损伤的机制及其对凋亡的影响.docVIP

二氮嗪预处理减轻大鼠海马神经细胞缺氧损伤的机制 及其对凋亡的影响 朱斌 叶铁虎 中国医学科学院 中国协和医科大学 北京协和医院麻醉科100730 [摘要] 目的 研究ATP敏感性钾通道开放剂二氮嗪预处理对原代培养新生Wister大鼠海马神经细胞缺氧/复氧损伤的影响及其相关机制；并检测二氮嗪对缺氧/复氧所致神经元凋亡的影响。 方法 在96孔无菌培养板上原代培养10d的海马神经细胞随机分为2组：二氮嗪组(Dia组)，缺氧前给予50μM 的二氮嗪行预处理；对照组(Con组)，给予二氮嗪组的赋形剂，即含2‰DMSO的0.01mol/L磷酸盐缓冲液；两组细胞在给药后接受3h缺氧24h复氧和3h缺氧48h复氧，测定细胞存活能力及LDH漏出率。在48孔无菌培养板上原代培养10d的海马神经细胞也随机分为上述两组，细胞在给药后接受3h缺氧24h复氧，用以测定丙二醛和超氧化物歧化酶。35mm无菌培养皿原代培养10d的海马神经细胞随机分为上述两组，细胞在给药后接受3h缺氧、3h缺氧24h复氧和3h缺氧48h复氧，利用Annexin V-PI双染法流式细胞仪测定神经元早期凋亡和死亡情况。 结果 二氮嗪组细胞存活能力在3h缺氧24h复氧后显著大于对照组，而LDH漏出率在3h缺氧48h复氧后显著低于对照组（表1）。丙二醛在二氮嗪组显著低于对照组；超氧化物歧化酶SOD活力在二氮嗪组显著高于对照组（表2）。在各检测时点，二氮嗪组的神经元死亡率要显著低于对照组，但早期凋亡率却要显著高于对照组（表3）。 结论 50μM的二氮嗪预处理能显著减轻缺氧/复氧对原代培养新生Wister大鼠海马神经细胞的损伤，其保护机制与增加超氧化物歧化酶SOD活性有关。尽管二氮嗪能减轻缺氧/复氧所导致的神经细胞死亡，但是同时也增加了神经细胞凋亡。 [关键词] 二氮嗪；细胞缺氧；海马；ATP敏感性钾通道；凋亡 表1 50μM 二氮嗪对新生大鼠海马神经细胞缺氧复氧后存活能力及LDH漏出率的影响 （n=24, ） 组别 存活细胞OD值 LDH漏出率 24h 48h 24h 48h Con组 1.93±0.22 1.84±0.21 0.34±0.02 0.50±0.03 Dia组 2.09±0.30△ 1.88±0.24 0.34±0.03 0.46±0.03△ 与对照组比较，△P0.01 表2 50μM 二氮嗪对新生大鼠海马神经细胞缺氧复氧后MDA浓度及SOD活性的影响（n=8 ） 组别 MDA（nmol/ml） SOD（NU/ml） Con组 4.16±1.02 76±8 Dia组 2.28±0.71△ 86±11* 与对照组比较，*P0.05；△P0.01 表3 50μM Diazoxide对新生大鼠海马神经细胞缺氧/复氧后死亡率与早期凋亡率的影响 （%， n=5， ） 组别 复氧3h后 复氧24h后 复氧48h后 死亡率 早期凋亡率 死亡率 早期凋亡率 死亡率 早期凋亡率 Con 20.4±1.9 30.4±1.8 20.5±0.6 31.7±3.8 22.5±0.9 42.1±3.0 Dia 13.9±0.7△ 38.1±1.3△ 16.0±1.5* 45.7±2.2△ 16.8±1.3△ 52.1±3.6* 与对照组比较，*P0.05；△P0.01