鸭副粘病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立.pdfVIP

鸭副粘病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立.pdf

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第二届全国禽病分子生物技术青年学者论坛论文集 鸭副粘病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立 孙敏华11,董嘉文1,陈少莺2,周秀蓉1,吕殿红1,李林林1,胡奇林1’ (1.广东省农业科学院兽医研究所,广东省公共卫生公共实验室,广东广州510640;2.福建省农 科院畜牧兽医研究所。福建福州350013) 摘要:本研究利用蔗糖密度梯度离心纯化后的鸭副粘病毒免疫6周龄雌性BALB/ct]、鼠,取免疫 后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/O融合。采用ELISA方法筛选阳性细胞克隆,经3次亚克隆培养后获 得l株能稳定分泌鸭副粘病毒特异性单克隆抗体的细胞株2CI,经鉴定,其抗体亚类为IgM。随后。 以PEG纯化后的2CI腹水为捕获抗体,辛酸.硫酸铵纯化的兔抗鸭副粘病毒多克隆抗体为第■抗体, HRP标记的羊抗兔抗体作为酶标抗体,建立了检测鸭副粘病毒抗原的双抗体夹,Il,ELISA方法。结果 表明,当2Cl包被量为4嵋/孔,鸭副粘病毒110稀释,兔抗鸭副粘病毒多抗作用量为0.1吲孔,HRP标 记的羊抗兔二抗1:10000倍稀释,每次作用时间为1h时,P/N比值最高,且阳性OD值最接近1.0。该方 法可以检测出O.2陷纯化病毒,比传统的HA试验至少敏感64倍:重复性好,批间和批内变异系数均 应。 关键词:鸭副粘病毒:单克隆抗体;夹,巴,ELISA ofMonoelonal Duck andEstablishment Preparation AntibodyagainstParamyxovirus-1 ofaSandwich Immunosorbent Enzyme—linked Assay SUN Min—hua,LV Jia-wen,LILin-iin,HU Dian-hong,DONG Qi-lin’ ofPublic Research (1.GuangdongOpenLaboratoryHealth,GuangdongVeterinary Institute, 1 of 0640,China:2.Institute GuangdongAcademyofAgriculturalSciences,Guangzhou,Guangdong,5 Animal and HusbandryVeterinaryMedicine,FujianAcademyofAgriculturalSciences,Fuzhou,Fujian 350013) Abstract:Inthis cellstainwas confusionSP2/0cellsand experiment,onehybridoma developedby cellsofimmunizedBALB/cfemalemousewithduck Was by spleen paramyxovirus-!,whichpurified sucrose cellstain three 2C!,which densitygradientcentrifugation.Thepositivehybridoma undergone times determined

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