动物肝脏中DNA的提取.docVIP

南京大学医学院生化实验报告 ——————————————————————————— 动物肝脏中DNA的提取 一 实验目的 学习和掌握用浓盐法从动物组织中提取DNA的原理和技术 了解分离提取DNA的一般原理 生物体组织细胞中的脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），大部分与蛋白质结合，以核蛋白——脱氧核糖核蛋白（DNP）和核糖核蛋白（RNP）的形式存在，这两种复合物在不同的电解质溶液中的溶解度有较大差异。在低浓度的NaCl溶液中，DNP的溶解度随NaCl浓度的增加而逐渐降低，当NaCl浓度达到0.14mol/L时，DNP的溶解度约为纯水中溶解度的1%（几乎不溶）；但当NaCl浓度继续升高时，DNP的溶解度又逐渐增大，当NaCl浓度增至0.5mol/L时，DNP的溶解度约等于纯水中的溶解度，当NaCl浓度继续增至1.0mol/L时，DNP的溶解度约为纯水中溶解度的2倍（溶解度很大）。而RNP则不一样，它在浓NaCl溶液和稀NaCl溶液中的溶解度都很大。因此，可以利用不同浓度的NaCl溶液将DNP和RNP分别抽提出来。在低浓度的NaCl溶液中，DNP的溶解度随NaCl浓度的增加而逐渐降低，当NaCl浓度达到0.14mol/L时，DNP的溶解度约为纯水中溶解度的1%（几乎不溶）；但当NaCl浓度继续升高时，DNP的溶解度又逐渐增大，当NaCl浓度增至0.5mol/L时，DNP的溶解度约等于纯水中的溶解度，当NaCl浓度继续增至1.0mol/L时，DNP的溶解度约为纯水中溶解度的2倍（溶解度很大）。而RNP则不一样，它在浓NaCl溶液和稀NaCl溶液中的溶解度都很大。因此，可以利用不同浓度的NaCl溶液将DNP和RNP分别抽提出来。 将抽提得到的DNP用十二烷基硫酸钠（SDS）处理，DNA即与蛋白质分开，可用氯仿-异丙醇将蛋白质沉淀除去，而DNA溶于溶液中，加入适量的乙醇，DNA即析出，进一步脱水干燥，即得白色纤维状的DNA粗制品。 为了防止DNA(或RNA)酶解，提取时加入乙二胺四乙酸 (EDTA)。大部分多糖在用乙醇或异丙醇分级沉淀时即可除去。 DNA中的2-脱氧核糖在酸性环境中与二苯胺试剂一起加热产生蓝色反应。 制备过程应在低温下（4度）进行，防止过酸，过碱及其他引起核降解的因素。必要时加入酶抑制剂（柠檬酸、EDTA等可以抑制DNA酶活性，SDS或苯酚等蛋白质变性剂可以使 核酸降解酶破坏） 动植物的DNA核蛋白能溶于水及高浓度的盐溶液，但在0.14mol/l的盐溶液中溶解度很低，而RNA核蛋白则溶于0.14mol/l盐溶液，可利用不同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中分别抽提出来。在核酸分子中，由于磷酸基的存在，使其酸性占优势， DNA或RNA都能溶于水中，而不溶于有机溶剂。用络合剂EDTA抑制核酸水解酶的活力, 同时用去污剂SDS把蛋白质和DNA分开,再用氯仿-异丙醇作为蛋白质的变性剂沉淀蛋白质, 最后用乙醇把DNA沉淀出来。 三 实验器材 1. 捣碎机 2. 离心机 3. 手术剪 4. 离心管 5. 刻度吸管 6. 烧杯（100ml，250ml） 7. 玻棒 8. 新鲜动物肝脏 9.石英比色皿 10.量筒（10ml，100ml） 11.容量瓶（50ml） 四 实验试剂 1、0.1mol/LNaCl-0.05mol/L柠檬酸钠溶液（pH6.8）。 2、0.015mol/LNaCl-0.0015mol/L柠檬酸三钠溶液：氯化钠0.828克及柠檬酸三钠0.341克溶于蒸馏水，稀释至1000ml。 3、95%乙醇（A.R.）。 五 实验操作 1）粗提 1． 2． 3． 4． 3）沉淀DNA 5． 6．1、 2、 3、。 4、 1